Rekta RT-qPCR Kit III
Ilaro Priskribo:
◮Rekta RT-qPCR Kit, uzante Foreasy Reverse Transcriptase kaj Foreasy HS Taq DNA Polymerase evoluanta de Foregene, kun unika reakcia bufro, faras ĉi tiun ilaron kun forta rezisto kaj kongruo, kaj ĝi povas rekte testi reagon uzi Foregene Lysis-sistemon kiel ŝablonon.Ĉi tiu ilaro povas kandidatiĝi por disvolvo de ilaro pri detektado de nuklea acido COVID-19 kaj aliaj patogenaj bakterioj.
Priskribo
Rekta RT-qPCR-ilaro provizas aparte pakitan RT-qPCR-bufferon (kun miksita Foreasy HS Taq DNA-polimerazo) kaj alta efikaForeasy inversa transkriptazo (MMLV),igante ĝin oportuna por la kreado de back-end ilaroj kaj sistema alĝustigo，ene de simpla konfirmo.
Rekta RT-qPCR Kit, uzante Foreasy Reverse Transcriptase kaj Foreasy HS Taq DNA Polymerase evoluanta de Foregene, kun unika reakcia bufro, faras ĉi tiun ilaron kun forta rezisto kaj kongruo, kaj ĝi povas rekte testi reagon uzi Foregene Lysis-sistemon kiel ŝablonon.Ĉi tiu ilaro povas kandidatiĝi por disvolvo de ilaro pri detektado de nuklea acido COVID-19 kaj aliaj patogenaj bakterioj.
Ĉi tiu ilaro povas rekte esti la komponanto de la IVD-produkto, uzante facile kaj rapide.Ĝi nur bezonas facilan konfirmon, sen disvolvi denove.
Specifoj
500T, 50,000T
Kit-komponantoj
| Enhavo de ilaro (20 μL reagsistemo) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Rinversa Transkriptazo(200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| 2× Rekta qPCRMix-Taqman | 1 ml × 5 | 500 ml×1 |
| Instruo | 1 | 1 |
Funkciaj Paŝoj
A: Preparu ŝablonon kaj reakciilon
1. Preparu pretan RNA-ŝablonon (Oni rekomendas uzi Foregene Total RNA Isolation Kit serio kit por ĉerpi kaj purigi RNA ŝablono) aŭ specimeno kraka produkto (Estas rekomendite uzi Foregene Lysis sistemo), specifa enkonduko (10 μM) kaj aliaj rilataj konsumeblaj, instrumento.
2. Metu la 2× Rektan RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O kaj 20× ROX Referenca Tinkturo (se ĝi estas bezonata) en la skatolon kun glacio, farante ĉi tiujn fandi nature, kaj miksita milde.
B: Preparu de RT-qPCR-sistemo
Akiru duonon de la volumo de reagbufro de reagsistemo (ekzemple, se la volumo de la sistemo estas 20 μL, ĝi bezonas ricevi 10 μL 2× Rektan RT-qPCR Buffer). Porresponda kvanto de enzimo, ni sugestas tionM-MLV: 10-30 U/20 μL reagsistemo,TaqDNA-polimerazo：1-2 U/20 μL reagsistemoĉi tio estas nia sugesto, vi devus testi kaj ĝustigi ĝin), aldonu RNA-ŝablonon, specifajn enkondukojn kaj enketojn, kaj aldonu RNase-Free ddH2O ĝis 20 μL.La specifa preparado de RT-qPCR-reaga sistemo povas esti raportita al la sekva tabelo 1.
Tablo 1: Preparu de RT-qPCR-sistemo
| Komponanto | Volumo | Fina koncentriĝo |
| 2× Rekta RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy inversa transkriptazo (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Antaŭen Enkonduko (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Inversa Enkonduko (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Sondo (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Ŝablono (RNA aŭ Lysate) | X μL | |
| 20× ROX-Referenca Tinkturo | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Tuta Volumo | 20 μL |
Notu: Forward Primer kaj Reverse Primer estas specifaj enkondukoj de celgeno.La sistemo de la qPCR povus esti ĝustigita laŭ praktikaj eksperimentaj kaj PCR-modeloj.Ni rekomendas 400nM por la fina koncentriĝo de la plej multaj enkondukoj.Alĝustigu la volumenon de specifaj enkondukoj kaj sondiloj laŭ la preta koncentriĝo kaj la rekomendita fina koncentriĝo, bonvolu.
1*: Elektu taŭgan finan koncentriĝon de ROX Reference Dye laŭ malsamaj kvantaj PCR-instrumentoj.La optimuma ROX Reference Dye-koncentriĝo de oftaj kvantaj PCR-instrumentoj estas montrita en la sekva tabelo:
| Kvantaj PCR-instrumentoj | Fina koncentriĝo de ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Paŝo Unu,ktp. | 1× (ekzemple, aldonu 1μl 20×ROX-Referencan Tinkturon en 20 μL-reagsistemon) |
| ABI 7500, 7500 Rapida, Stratagene Mx3000P, Mx3005P kaj Mx4000, ktp. | 0.5× (ekzemple, aldonu 0.5μl 20×ROX-Referencan Tinkturon en 20 μL-reagsistemon) |
| Roche PCR-instrumento, Bio-Rad PCR-instrumento, Eppendorf-kvanta PCR-instrumento, ktp. | Sen ROX Referenca Tinkturo |
Stokado kaj Konsumodaŭro
La ilaro devas esti stokita ĉe -20 ± 5 ℃.Ĝi devas tuj esti stokita en -20℃ termostatika fridujo.La validperiodo estas 2 jaroj se ĝi estas konservita en taŭga stato.
