Ĉela Rekta RT qPCR Ilaro—SYBR GREEN I Rekta Ĉela Lizo Ĉelo Preta Unupaŝa qRT-PCR Ilaro
Priskriboj
Ĉi tiu ilaro uzas unikan lizbufrsistemon, kiu povas rapide liberigi RNA de kulturitaj ĉelprovaĵoj por RT-qPCR-reagoj, tiel forigante la tempopostulan kaj penigan RNA-purigan procezon.La RNA-ŝablono povas esti akirita en nur 7 minutoj.La 5×Rekta RT Miksaĵo kaj 2×Rektaj qPCR Mix-SYBR-reakciiloj provizitaj de la ilaro povas rapide kaj efike akiri realtempajn kvantajn PCR-rezultojn.
5×Rekta RT Miksaĵo kaj 2×Rekta qPCR Mix-SYBR havas fortan inhibitoran toleremon, kaj la lisato de la provaĵoj povas esti uzata kiel ŝablono por RT-qPCR rekte.Ĉi tiu ilaro enhavas la unikan RNA-alt-afinecan Foregene inversan transkriptazon, kaj Hot D-Taq DNA-polimerazon, dNTPojn, MgCl.2, reagbufro, PCR-optimumiganto kaj stabiligilo.
Specifoj
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit-komponantoj
| Parto I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Parto II | DNA Eraser |
| 5× Rekta RT Miksaĵo | |
| 2× Rekta qPCR Miksaĵo-SYBR | |
| 50× ROX-Referenca Tinkturo | |
| RNazo-Libera ddH2O | |
| Instrukcioj | |
Trajtoj & avantaĝoj
■Simpla kaj efika: kun Cell Direct RT-teknologio, RNA-provaĵoj povas esti akiritaj en nur 7 minutoj.
■ La specimena postulo estas malgranda, tiel malalta kiel 10 ĉeloj povas esti provitaj.
■ Alta rendimento: ĝi povas rapide detekti RNA en ĉeloj kultivitaj en 384, 96, 24, 12, 6-putoplatoj.
■ DNA Eraser povas rapide forigi liberigitajn genarojn, multe redukti la efikon al postaj eksperimentaj rezultoj.
■ Optimumigita RT kaj qPCR-sistemo igas la du-ŝtupan RT-PCR-inversan transskribon pli efika kaj PCR pli specifa, kaj pli imuna al RT-qPCR-reakinhibitoroj.
Kit-aplikaĵo
Amplekso de apliko: kulturitaj ĉeloj.
- RNA liberigita per specimena lizo: nur aplikebla al la ŝablono RT-qPCR de ĉi tiu ilaro.
- La ilaro povas esti uzata por la sekvaj celoj: analizo de genesprimo, konfirmo de siRNA-mediata gena silentiga efiko, ekzamenado de drogoj ktp.
Diagramo
Stokado kaj Konsumodaŭro
Parto I de ĉi tiu ilaro devas esti stokita ĉe 4℃;Parto II devas esti stokita ĉe -20 ℃.
Foregene Protease Plus II devas esti stokita ĉe 4℃, ne frostiĝu ĉe -20 ℃.
Reakciilo 2×Rekta qPCR Mix-SYBR devus esti stokita ĉe -20℃en la mallumo;se uzata ofte, ĝi ankaŭ povas esti stokita ĉe 4℃ por mallongdaŭra konservado (uzu ene de 10 tagoj).
Real Time PCR-komencaj dezajnaj principoj
Antaŭen Enkonduko kaj Inversa Enkonduko
Por Real Time PCR, primer-dezajno estas tre grava.Enkondukoj estas rilatitaj al la specifeco kaj efikeco de PCR-plifortigo, kaj povas esti dizajnitaj rilate al la sekvaj principoj:
Primer-longo: 18-30bp.
GC enhavo: 40-60%.
Tm-valoro: Primer-dezajnosoftvaro, kiel ekzemple Primer 5, povas doni la Tm-valoron de la enkonduko.La Tm-valoroj de la kontraŭfluaj kaj kontraŭfluaj enkondukoj devus esti kiel eble plej proksimaj.Oni ankaŭ povas uzi la kalkulformularon de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Dum elfarado de PCR, temperaturo sub la enkonduka Tm-valoro de 5 °C estas ĝenerale elektita kiel la kalcia temperaturo (la ekvivalenta pliiĝo en la kalcia temperaturo povas pliigi la specifecon de la PCR-reago).
Enkondukoj kaj PCR-produktoj:
Dezajno primer PCR plifortigo produkto longo estas prefere 100-150bp.
Dezajnaj enkondukoj en la sekundara struktura areo de la ŝablono devas esti evititaj kiel eble plej multe.
Evitu la formadon de 2 aŭ pli komplementaj bazoj inter la 3′ finoj de kontraŭfluaj kaj laŭfluaj enkondukoj.
Primer 3′ fina bazo ne povas ĉeesti kun 3 aldonaj sinsekvaj G aŭ C.
La enkondukoj mem ne povas havi komplementajn strukturojn, alie formiĝos harpingla strukturo, influante PCR-plifortigon.
ATCG devas esti distribuita kiel eble plej egale en la enkonduka sekvenco, kaj la 3′ fina bazo devus esti evitita kiel T.
Apendico 1: Komponaĵa suplementa pako de Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Ĉela Liza Solvo
|
| |||
| Kit-komponantoj (24-puto lizsistemo/puto) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Partomi | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartoII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Miksaĵo
|
| |
| Kit-komponantoj (20 μl reagsistemo) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Rekta RT Miksaĵo | 800 μl |
| RNazo-Libera ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit-komponantoj (20 μl reagsistemo) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Rekta qPCR Miksaĵo-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX-Referenca Tinkturo | 40 μl | 200 μl |
| RNazo-Libera ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instrukciaj Manlibroj:
