Cell Direct RT qPCR Kit - Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Unu-paŝa qRT-PCR Ilaro Probe
Priskriboj
Ĉi tiu produkto uzas unikan lizan bufran sistemon por rapide liberigi RNA el kulturitaj ĉelaj specimenoj por RT-qPCR-reagoj, forigante la temporaban kaj penigan RNA-purigan procezon, kaj nur 7 minutojn por akiri la bezonatan RNA-ŝablonon, kun la 5× Rekta RT-Miksaĵo, 2× Rekta qPCR-Miksaĵo-Taqman provizita de la ilaro povas rapide kaj efike akiri rezultojn de PCR rapide kaj kvante.
5× Rekta RT-Miksaĵo kaj 2× Rekta qPCR-Miksaĵo-Taqman havas fortan inhibitoran toleremon kaj povas elfari efikan inversigon kaj specifan plifortigon uzante la lizaton de la specimeno por esti mezurita kiel ŝablono.La reakciilo enhavas Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reago-Buffer, PCR-Optimizilo kaj Stabiligilo, kiu povas esti uzata kun lizo-bufro por rapide kaj facile detekti specimenojn, kaj havas la karakterizaĵojn de alta sentemo, specifeco kaj stabileco.
Specifoj
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit-komponantoj
| Rapida FacilaTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kit-komponantoj 20μl qPCR-Reaga Sistemo | DRT-01021 | DRT-01022 | Notu | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Parto I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Ĉela Lizo |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Parto II | DNA Eraser | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Rekta RT-Miksaĵo * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Rekta qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX-Referenca Tinkturo | 40 μl | 200 μl | ||
| RNazo-Libera ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Instrukcia Manlibro | 1 peco | 1 peco | ||
*:Ĉela lizo, 5×Rekta RT-Miksaĵo, 2× Rekta qPCR-Miksaĵo-Taqman aĉeteblas aparte
Trajtoj & avantaĝoj
■Simpla kaj efika: kun Cell Direct RT-teknologio, RNA-provaĵoj povas esti akiritaj en nur 7 minutoj.
■ La specimena postulo estas malgranda, tiel malalta kiel 10 ĉeloj povas esti provitaj.
■ Alta rendimento: ĝi povas rapide detekti RNA en ĉeloj kultivitaj en 384, 96, 24, 12, 6-putoplatoj.
■ DNA Eraser povas rapide forigi liberigitajn genarojn, multe redukti la efikon al postaj eksperimentaj rezultoj.
■ Optimumigita RT kaj qPCR-sistemo igas la du-ŝtupan RT-PCR-inversan transskribon pli efika kaj PCR pli specifa, kaj pli imuna al RT-qPCR-reakinhibitoroj.
Kit-aplikaĵo
Amplekso de apliko: kulturitaj ĉeloj.
- RNA liberigita per specimena lizo: nur aplikebla al la ŝablono RT-qPCR de ĉi tiu ilaro.
- La ilaro povas esti uzata por la sekvaj celoj: analizo de genesprimo, konfirmo de siRNA-mediata gena silentiga efiko, ekzamenado de drogoj ktp.
Stokado kaj Konsumodaŭro
Parto I de ĉi tiu ilaro devas esti stokita ĉe 4℃;Parto II devas esti stokita ĉe -20 ℃.
Foregene Protease Plus II devas esti stokita ĉe 4℃, ne frostiĝu ĉe -20 ℃.
Reakciilo 2×Rekta qPCR Mix-Taqman devus esti stokita ĉe -20℃en la mallumo;se uzata ofte, ĝi ankaŭ povas esti stokita ĉe 4℃ por mallongdaŭra konservado (uzu ene de 10 tagoj).
Real Time PCR-komencaj dezajnaj principoj
Antaŭen Enkonduko kaj Inversa Enkonduko
Por Real Time PCR, primer-dezajno estas tre grava.Enkondukoj estas rilatitaj al la specifeco kaj efikeco de PCR-plifortigo, kaj povas esti dizajnitaj rilate al la sekvaj principoj:
- Primer-longo: 18-30bp.
- GC enhavo: 40-60%.
- Tm-valoro: Primer-dezajnosoftvaro, kiel ekzemple Primer 5, povas doni la Tm-valoron de la enkonduko.La Tm-valoroj de la kontraŭfluaj kaj kontraŭfluaj enkondukoj devus esti kiel eble plej proksimaj.Oni ankaŭ povas uzi la kalkulformularon de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Dum elfarado de PCR, temperaturo sub la enkonduka Tm-valoro de 5 °C estas ĝenerale elektita kiel la kalcia temperaturo (la ekvivalenta pliiĝo en la kalcia temperaturo povas pliigi la specifecon de la PCR-reago).
- Enkondukoj kaj PCR-produktoj:
- Dezajno primer PCR plifortigo produkto longo estas prefere 100-150bp.
- Dezajnaj enkondukoj en la sekundara struktura areo de la ŝablono devas esti evititaj kiel eble plej multe.
- Evitu la formadon de 2 aŭ pli komplementaj bazoj inter la 3′ finoj de kontraŭfluaj kaj laŭfluaj enkondukoj.
- Primer 3′ fina bazo ne povas ĉeesti kun 3 aldonaj sinsekvaj G aŭ C.
- La enkondukoj mem ne povas havi komplementajn strukturojn, alie formiĝos harpingla strukturo, influante PCR-plifortigon.
- ATCG devas esti distribuita kiel eble plej egale en la enkonduka sekvenco, kaj la 3′ fina bazo devus esti evitita kiel T.
Apendico1:Cell RektaRT-qPCR Ilaro komponaĵot suplementa pako
1.Cell Lysis Solvo
| Ĉela Liza Solvo | |||
| Kit-komponantoj (24-puto lizsistemo/puto) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Partomi | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartoII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Miksaĵo | |
| Kit-komponantoj (20 μl reagsistemo) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Rekta RT Miksaĵo | 800 μl |
| RNazo-Libera ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Miksaĵo | ||
| Kit-komponantoj (20 μl reagsistemo) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Rekta qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX-Referenca Tinkturo | 40 μl | 200 μl |
| RNazo-Libera ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instrukciaj Manlibroj:
