Animal Tissue Direct PCR-ilaro-UNG (sen Sampling Tools) Protokolo
Ilaro Priskribo:
Rekte uzu bestan histan lizaton kiel ŝablonon por PCR-ampligado, sen aparta eltiro de DNA, rapida kaj alta sentemo.Aldonita UNG-kontraŭpoluada sistemo por forigi falsajn pozitivojn.
◮Neniu tempopostula kaj multekosta DNA-purigo estas postulata.
◮La specimena postulo estas malgranda, nur prenu ununuran semon.
◮Ne necesas specialaj traktadoj kiel muelado kaj disbatado, kaj la operacio estas simpla.
◮La optimumigita PCR-sistemo ebligas PCR havi pli altan specifecon kaj pli fortan toleremon al PCR-reakinhibitoroj.
Priskriboj
Ĉi tiu ilaro uzas unikan lizbufrsistemon por rapide liberigi genoman DNA de besthistoprovaĵoj por PCR-reagoj, do ĝi estas precipe taŭga por grandskala genetika testado.
La procezo de liberigo de genoma DNA de la lizbufro estas kompletigita ene de 10-30 minutoj je 65 °C.Neniuj aliaj procezoj kiel ekzemple proteino kaj RNA-forigo estas postulataj, kaj la liberigita spura DNA povas esti utiligita kiel ŝablono por PCR-reago.
2×PCR FacilaTMMix (UNG) uzas dUTP anstataŭ dTTP surbaze de 2×PCR FacilaTMMiksu, kaj aldonas UNG-enzimon (Uracil-N-glikosilazo) kiu povas degradi la ŝablonon enhavantan dUTP samtempe.Antaŭ la PCR-reago, la UNG-enzimo kutimas degradi la PCR-produkton enhavantan uracilon.La UNG-enzimo ne havos ajnan efikon al la ŝablono kiu ne enhavas uracilon, tiel certigante la specifecon kaj precizecon de plifortigo kaj malhelpante la eblecon de PCR-produktoj poluado dum grandskala genetika testado.
D-Taq DNA-polimerazo estas DNA-polimerazo speciale evoluigita fare de Foregene por rektaj PCR-reagoj.D-Taq DNA-polimerazo havas fortan toleremon al diversaj PCR-reagaj inhibitoroj, kaj povas efike plifortigi spurkvantojn de DNA en diversaj kompleksaj reagsistemoj, kaj la plifortiga rapido povas atingi 2Kb/min, kio estas speciale taŭga por Rekta PCR-reago.
Kit-komponantoj
| Parto I | Buffer AL |
| Antaŭgena Proteazo | |
| 6× DNA-Ŝarĝa Bufro | |
| Parto II | 2×PCR FacilaTMMiksaĵo (UNG) |
Trajtoj & avantaĝoj
■Neniu tempopostula kaj multekosta DNA-purigo
■ La specimena postulo estas malgranda, eĉ 5mg de besta histo povas esti provita.
■ Ne necesas speciala traktado kiel muelado kaj disbatado, kaj la operacio estas simpla.
■ Optimumigita PCR-sistemo igas PCR havi pli altan specifecon kaj pli fortan toleremon al PCR-reagaj inhibitoroj.
■ Kontraŭpolua PCR-sistemo 2×PCR FacilaTMMix (UNG) efike forigas la poluon kaŭzitan de PCR-produktoj kaj certigas la specifecon kaj precizecon de plifortigo.
Kit-parametroj
Apliko: diversaj bestaj histoj.
DNA liberigita de prova lizo: nur uzata kiel PCR-ŝablono.
La ilaro povas esti uzata por la sekvaj celoj: identigo de transgenozo, besta genotipado ktp.
Laborfluo
Stokado kaj Konsumodaŭro
Parto I de ĉi tiu ilaro devas esti stokita ĉe 2-8℃.
La reakciilo Buffer AL povas esti stokita dum 12 monatoj sub sekaj kondiĉoj;ĝi povas esti stokita ĉe 2-8℃por pli longa stokado.
Reagent Foregene Protease havas unikan formulon.Por certigi ĝian agadon kaj stabilecon, bonvolu konservi ĝin ĉe 4℃dum 12 monatoj.
Reakciilo 6×DNA Loading Buffer povas esti stokita ĉe 4℃aŭ -20℃Longtempe.
Parto II de ĉi tiu ilaro devas esti stokita ĉe -20℃.
Reakciilo 2×PCR FacilaTMMiksaĵo (UNG), se ĝi estas uzata ofte, ĝi ankaŭ povas esti konservita ĉe 4℃por mallongdaŭra konservado (uzu ene de 10 tagoj).
