(96-puto) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
Priskriboj
La(96-puto) Rapida FacilaTM Ĉela Rekta RT-qPCR Ilaro–SYBR Verda Iprovizasunika liza bufrosistemoto rapide liberigas RNAel kulturita ĉelospecimenoj por RT-qPCR-reagoj, forigante la tempopostulan kaj penigaRNA-purigprocezo, kaj nur daŭras 7 minutojn por akiri la postulatan RNA-ŝablonon.La5× Rekta RT Miksaĵokaj2× Rekta qPCR Miksaĵo-SYBRprovizita en la skatolo povas rapide kajefike akiri realtempan kvantanPCR-rezultoj.
5× Rekta RT-Miksaĵo kaj 2× Rekta qPCR-Miksaĵo-SYBR havas fortan inhibitoran toleremon, kaj povas uzi la lizaton de la provaĵo por esti testita kiel ŝablono por efika inversa transskribo kaj specifa plifortigo.La reakciilo enhavas Foregene unikan Inversan Transskribazon kun alta afineco por RNA, same kiel Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , reago-bufro, PCR-optimigilo kaj stabiligilo, kaj povas esti uzata kune kun la lizo-bufro por detekti la specimenon rapide, facile kaj precize, kaj ĝi havas la karakterizaĵojn de alta sentemo, forta specifeco kaj bona stabileco.
La ilaro estas celita al mikrosistema lizo de 96-bone kulturitaj ĉeloj, kaj havas bonan unuformecon kaj konsistencon;la ilaj komponantoj provizas 96 lizajn reagojn, 96 inversajn transskribajn reagojn kaj 96×2 qPCR-reagojn, kiuj povas renkonti la 96-putajn ĉelplatojn por unufoja uzo, evitante la poluadon kaŭzitan de ripeta malfermo, frostigo kaj degelo de reakciiloj kaj la degenero de la agado de reakciiloj.
Kit-komponantoj
| Kit-komponado ( 50 μL liza sistemo/20 μLRT reagsistemo /20μL qPCR-reagsistemo) | DRT-03011 | Rimarko | |
| 96T | |||
| PartoI | BufroCL | 5 ml | ĈeloLizo |
| AntaŭgenoProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufroST | 500 μL | ||
| Parto II | DNASkrapgumo | 100 μL | |
| 5× Rekta RT Miksaĵo | 400 μL | RT | |
| 2× Rekta qPCR Miksaĵo-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX-Referenca Tinkturo | 400µL | ||
| RNazo- SenpagaddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mĉiujara | 1 peco | 1 porcio | |
*: La liza reakciilo DNA Eraser estas inkluzivita en Part II de la ilaro;Ĉela Lizo, RT, kaj qPCR-komponentoj povas esti aĉetitaj aparte.
Trajtoj & avantaĝoj
■Simpla kaj efika: kun Cell Direct RT-teknologio, RNA-provaĵoj povas esti akiritaj en nur 7 minutoj.
■ La specimena postulo estas malgranda, tiel malalta kiel 10 ĉeloj povas esti provitaj.
■ Alta rendimento: ĝi povas rapide detekti RNA en ĉeloj kultivitaj en 384, 96, 24, 12, 6-putoplatoj.
■ DNA Eraser povas rapide forigi liberigitajn genarojn, multe redukti la efikon al postaj eksperimentaj rezultoj.
■ Optimumigita RT kaj qPCR-sistemo igas la du-ŝtupan RT-PCR-inversan transskribon pli efika kaj PCR pli specifa, kaj pli imuna al RT-qPCR-reakinhibitoroj.
Kit-aplikaĵo
Amplekso de apliko: kulturitaj ĉeloj.
- RNA liberigita per specimena lizo: nur aplikebla al la ŝablono RT-qPCR de ĉi tiu ilaro.
- La ilaro povas esti uzata por la sekvaj celoj: analizo de genesprimo, konfirmo de siRNA-mediata gena silentiga efiko, ekzamenado de drogoj ktp.
Stokado kaj Konsumodaŭro
Parto I de ĉi tiu ilaro devas esti stokita ĉe 4℃;Parto II devas esti stokita ĉe -20 ℃.
Foregene Protease Plus II devas esti stokita ĉe 4℃, ne frostiĝu ĉe -20 ℃.
Reakciilo 2×Rekta qPCR Mix-Taqman devus esti stokita ĉe -20℃en la mallumo;se uzata ofte, ĝi ankaŭ povas esti stokita ĉe 4℃ por mallongdaŭra konservado (uzu ene de 10 tagoj).
Real Time PCR-komencaj dezajnaj principoj
Antaŭen Enkonduko kaj Inversa Enkonduko
Por Real Time PCR, primer-dezajno estas tre grava.Enkondukoj estas rilatitaj al la specifeco kaj efikeco de PCR-plifortigo, kaj povas esti dizajnitaj rilate al la sekvaj principoj:
- Primer-longo: 18-30bp.
- GC enhavo: 40-60%.
- Tm-valoro: Primer-dezajnosoftvaro, kiel ekzemple Primer 5, povas doni la Tm-valoron de la enkonduko.La Tm-valoroj de la kontraŭfluaj kaj kontraŭfluaj enkondukoj devus esti kiel eble plej proksimaj.Oni ankaŭ povas uzi la kalkulformularon de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Dum elfarado de PCR, temperaturo sub la enkonduka Tm-valoro de 5 °C estas ĝenerale elektita kiel la kalcia temperaturo (la ekvivalenta pliiĝo en la kalcia temperaturo povas pliigi la specifecon de la PCR-reago).
- Enkondukoj kaj PCR-produktoj:
- Dezajno primer PCR plifortigo produkto longo estas prefere 100-150bp.
- Dezajnaj enkondukoj en la sekundara struktura areo de la ŝablono devas esti evititaj kiel eble plej multe.
- Evitu la formadon de 2 aŭ pli komplementaj bazoj inter la 3′ finoj de kontraŭfluaj kaj laŭfluaj enkondukoj.
- Primer 3′ fina bazo ne povas ĉeesti kun 3 aldonaj sinsekvaj G aŭ C.
- La enkondukoj mem ne povas havi komplementajn strukturojn, alie formiĝos harpingla strukturo, influante PCR-plifortigon.
- ATCG devas esti distribuita kiel eble plej egale en la enkonduka sekvenco, kaj la 3′ fina bazo devus esti evitita kiel T.
Apendico1:Cell RektaRT-qPCR Ilaro komponaĵot suplementa pako
1.Cell Lysis Solvo
| Ĉela Liza Solvo | |||
| Kit-komponantoj (24-puto lizsistemo/puto) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Partomi | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartoII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Miksaĵo | |
| Kit-komponantoj (20 μl reagsistemo) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Rekta RT Miksaĵo | 800 μl |
| RNazo-Libera ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Miksaĵo | ||
| Kit-komponantoj (20 μl reagsistemo) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Rekta qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX-Referenca Tinkturo | 40 μl | 200 μl |
| RNazo-Libera ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instrukciaj Manlibroj:
