Animal Total RNA Isolation Kit Total RNA Extraction kaj Purification Kits for Best Tissues & Cell
Ilaro Priskribo:
Rapide kaj efike ĉerpas altpuran kaj altkvalitan totalan RNA el diversaj bestaj histoj.
Ne necesas zorgi pri RNA-degenero.La tuta sistemo estas RNase-Libera
Efike forigu DNA per DNA-Puriga Kolumno
Forigu DNA sen aldoni DNazon
Simpla - ĉiuj operacioj estas finitaj ĉe ĉambra temperaturo
Rapida — operacio povas esti kompletigita en 30 minutoj
Sekura - neniu organika reakciilo uzata
Alta pureco - OD260/280≈1.8-2.1
Kitaj Priskriboj
50 Preparoj, 200 Preparoj
Ĉi tiu ilaro uzas laspinkolono kaj formulodisvolvita de nia kompanio, kiu povas ĉerpi altkvalitan kaj altkvalitan totalan RNA el diversaj bestaj histoj kun alta efikeco.Ĝi provizas efikan DNA-Purigan Kolumnon, kiu povas facile apartigi kaj adsorbi genoman DNA de la supernatante kaj histo lisato, simpla kaj tempo-ŝparado;Nur RNA-Kolumno povas efike ligi RNA kaj povas esti procesita samtempe kun unika formulo Multaj specimenoj.
La tuta sistemo estas RNase-Free, tiel ke la ĉerpita RNA ne estas degradita;Buffer RW1, Buffer RW2 bufrolavado sistemo, tiel ke la akirita RNA estas libera de proteino, DNA, jono, kaj organika komponaĵo poluado.
Kit-komponantoj
| Besta Totala RNA-Izola Ilaro | ||
| Kit-komponantoj | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Bufro RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Bufro RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Bufro RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Bufro RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNazo-Libera ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-nur-Kolumno | 50 | 200 |
| DNA-Puriga Kolumno | 50 | 200 |
| Instrukcia Manlibro | 1 peco | 1 peco |
Produktaj informoj
| Formato | Spin kolumno | Puriga komponanto | Foregene column, reakciilo |
| Fluo | 1-24 specimenoj | Tempo por preparo | ~30 min (24 specimenoj) |
| Centrifugilo | Surtabla centrifugilo | Piroliza apartigo | Centrifuga disiĝo |
| Specimeno | Besta histo;ĉelo | Kvanto de specimenoj | Histo: 10-20 mg;Ĉelo:(1-5)×106 |
| Elucia volumo | 50-200 μL | Maksimuma ŝarĝa volumo | 850 μL |
Trajtoj & avantaĝoj
■ Ne necesas zorgi pri RNA-degenero;la tuta sistemo estas RNase-Libera
■ Efike forigi DNA-uzantan DNA-Purigan Kolumnon
■ Forigi DNA sen aldoni DNazon
■ Simplaj-ĉiuj operacioj estas kompletigitaj ĉe ĉambra temperaturo
■ Rapida operacio povas esti kompletigita en 30 minutoj
■ Sekura-ne necesas organika reakciilo
■ Alta pureco -OD260/280≈1.8-2.1
Kit-aplikaĵo
Ĝi taŭgas por eltiro kaj purigo de totala RNA el diversaj freŝaj aŭ frostaj bestaj histoj aŭ kulturitaj ĉeloj.
Produktaj parametroj
■ Laŭfluaj aplikoj: unua-fadena cDNA-sintezo, RT-PCR, molekula klonado, Northern Blot, ktp.
■ Specimenoj: bestaj histoj, kulturitaj ĉeloj
■ Dozo: Ŝtofoj 10-20mg, Ĉeloj (2-5) × 106
■ Maksimuma DNA-liga kapablo de puriga kolumno: 80 μg
■ Eluvvolumo: 50-200 μl
Diagramo
Besta Totala RNA-Izola Ilaro traktita 20mg
Freŝaj musprovaĵoj, prenu 5% purigitan totalan RNA 1% agaron
Glikoĝela elektroforezo
1: Lieno 2: Reno
3: Hepato 4: Koro
Stokado kaj konservado
La ilaro povas esti konservita dum 24 monatoj ĉe ĉambra temperaturo (15–25 ℃) aŭ 2–8 ℃ por pli longa tempo.Buffer RL1 povas esti stokita je 4 ℃ dum 1 monato post aldonado de β-mercaptoetanolo (laŭvola).
Cititaj artikoloj
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA-Ŝargitaj Lipid-Similaj Nanopartikloj por Hepata Baza Redaktado Per la Optimumigo de Centra Komponita Dezajno.Adv.Funkto.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Spontanea apoptozo de ĉeloj en terapia stamĉelpreparo penas imunomodulajn efikojn per liberigo de fosfatidilserino.Signal Transduct Target Ther.2021 jul 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.SE:17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA-modifo plibonigas onkogenan mRNA-tradukon kaj antaŭenigas intrahepatan kolangiokarcinoman progresadon.Mol Ĉelo.2021 jul 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Modifo de Mettl14-Mediata m6A Faciligas Hepatan Regeneradon per Konservado de Endoplasma Retikulo Homeostazo.Ĉelo Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA-izoaltion-kompletoj por aliaj specimenaj fontojestas disponebla:
Ĉelo, planto, viruso, sango ktp.
RNA ne estas ĉerpita aŭ RNA-rendimentoj estas malaltaj
Ofte ekzistas diversaj faktoroj, kiuj influas reakivan efikecon, kiel ekzemple: histoprovaĵenhavo de RNA, metodo de operacio, eluovolumeno, ktp.
1. Glacia bano aŭ kriogena (4 °C) centrifugado estis farita dum operacio.
Rekomendo: Funkcii ĉe ĉambra temperaturo (15-25 °C) dum la tuta procezo, ne glacibanu kaj centrifugu ĉe malaltaj temperaturoj.
2. Nedeca specimena konservado aŭ troa specimena konservado.
Rekomendo: Konservu specimenojn ĉe -80 °C aŭ frostiĝu en likva nitrogeno kaj evitu ripetan frostig-degelon;provu uzi freŝan histon aŭ kulturitajn ĉelojn por RNA-eltiro.
3. Nesufiĉa specimena lizo.
Rekomendo: Kiam homogenigas histon, certigu, ke la histo estas sufiĉe homogenigita kaj ke la histoĉeloj estas sufiĉe dividitaj por klarigi la liberigon de RNA.
4. La eluvaĵo ne estas ĝuste aldonita.
Rekomendo: Konfirmu, ke RNase-Free ddH2O estas aldonita gute al la mezo de la puriga kolonmembrano.
5. La ĝusta volumo de absoluta etanolo ne estis aldonita al Buffer RL2 aŭ Buffer RW2.
Rekomendo: Sekvu la instrukciojn, aldonu la ĝustan volumon de absoluta etanolo al Buffer RL2 kaj Buffer RW2 kaj miksu bone antaŭ ol uzi la ilaron.
6. Dozo de specimeno de histo ne taŭgas.
Rekomendo: Uzu 10-20 mg da histo aŭ (1-5) × 106ĉeloj per 500 μl bufro RL1, ĉar troa histouzo povas rezultigi reduktitan RNA-ekstraktadon.
7. Nedeca eluciovolumo aŭ nekompleta elucio.
Rekomendo: La elucia volumo de la puriga kolumno estas 50-200 μl;se la elucia efiko ne estas kontentiga, oni rekomendas plilongigi la ĉambran temperaturon-lokigan tempon post aldoni antaŭvarmigitan RNase-Free ddH.2O, ekz. dum 5-10 min.
8.La puriga kolumno havas etanolan restaĵon post Buffer RW2-lavo.
Rekomendo: Se estas etanola restaĵo post Buffer RW2-lavado, malplena tubo centrifugado dum 1min, la tempo por la malplena tubo centrifuga operacio povas esti pliigita al 2min, aŭ la puriga kolumno povas esti metita ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por adekvate forigi la restan etanolon.
Purigita RNA estas degradita
La kvalito de la purigita RNA estas rilatita al faktoroj kiel ekzemple la konservado de la provaĵo, RNase-poluado, kaj manipulado, ktp.
1. Specimenoj de histo ne estas konservitaj ĝustatempe.
Rekomendo: Se histoprovaĵoj aŭ ĉeloj ne estas uzataj ĝustatempe post kolekto, tuj kriokonservu je -80 °C aŭ likva nitrogeno.Por ĉerpi RNA, uzu ĵus prenitan histon aŭ ĉelan specimenon kiam ajn eblas.
2. Ripeta frosto-degelo de histoprovaĵoj.
Rekomendo: Dum stokado de histoprovaĵoj, estas plej bone tranĉi ilin en malgrandajn pecojn por konservado, kaj forigi unu el la pecoj kiam ili uzas ilin por eviti ripetan frostig-degelon de la specimeno kaj la degeneron de RNA.
3. RNase estas enkondukita aŭ ne portanta forĵeteblajn gantojn, maskojn, ktp dum la operacio.
Rekomendo: RNA-ekstraktado-eksperimentoj estas plej bone faritaj en apartaj RNA-manipuladĉambroj kaj la tablo estas malbarita antaŭ la eksperimento.
Portu foruzeblajn gantojn kaj maskojn dum la eksperimento por minimumigi RNA-degeneron kaŭzitan de la enkonduko de RNase.
4. Reactivoj estas poluitaj per RNase dum uzo.
Rekomendo: Anstataŭigi per nova Besta Totala RNA-Izola Ilaro por rilataj eksperimentoj.
5. La centrifugilaj tuboj, pintoj ktp uzataj en RNA-manipulado estas poluitaj per RNase.
Rekomendo: Konfirmu, ke la centrifugilaj tuboj, pintoj, pipetoj ktp uzataj en RNA-eltiro estas ĉiuj RNase-Liberaj.
Purigita akirita RNA influas kontraŭfluajn eksperimentojn
RNA purigita de la purigo kolumno, se la salo jonoj, proteino enhavo estas tro granda influos la kontraŭflua eksperimento, kiel: inversa transskribo,Northern Blot et al.
1. La eluita RNA havas saljonajn restaĵojn.
Rekomendo: Konfirmu, ke la ĝusta volumo de etanolo estis aldonita al Buffer RW2 kaj faru 2 purigajn kolumnlavojn ĉe la centrifuga rapido indikita por operacio;se ekzistas iu sala jona restaĵo, lasu la purigan kolumnon al Buffer RW2 dum 5 minutoj ĉe ĉambra temperaturo kaj faru centrifugadon por maksimumigi la forigon de salo-poluado.
2. Etanola restaĵo en eluita RNA.
Rekomendo: Konfirmu, ke post la lavado de bufro RW2, faru la malplenan tubon centrifugan operacion kun la centrifuga rapido indikita por operacio, pliigu la tempon de la malplenan tubon centrifugan operacion al 2 minutoj se ankoraŭ estas etanola restaĵo, aŭ lasu ĝin ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj post la malplena tubo centrifuga por maksimumigi la forigon de etanola restado.
