Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit por Plant Riĉa je Polisakaridoj kaj Polifenoloj
Ilaro Priskribo:
Kat.No.RE-05021/05022/05024
Por purigado de totala RNA de ĝeneralaj plantprovaĵoj enhavantaj altan polisakaridon kaj polifenolkomponentojn.
Rapide ĉerpi altkvalitan totalan RNA el plantaj specimenoj kun alta enhavo de polisakaridoj kaj polifenoloj.
RNase-Libera Uzanta DNA-Puriga Kolumno
Simpla - ĉiuj operacioj estas finitaj ĉe ĉambra temperaturo
Rapida — operacio povas esti kompletigita en 30 minutoj
Sekura - neniu organika reakciilo uzata 
Specifoj
50 Preparoj, 200 Preparoj
La ilaro uzas la spinkolumnon kaj formulon evoluigitan de Foregene, kiu povas efike ĉerpi altpuran kaj altkvalitan totalan RNA el diversaj plantaj histoj kun alta polisakaridoj aŭ polifenoloj.Ĝi disponigas la DNA-purigan kolumnon, kiu povas facile forigi genoman DNA de la supernatante kaj hista lisato.Nur RNA-kolumno povas efike ligi RNA.La ilaro povas procesi grandan nombron da specimenoj samtempe.
La tuta sistemo ne enhavas RNazon, do la purigita RNA ne estos degradita.Buffer PRW1 kaj Buffer PRW2 povas certigi ke la RNA akirita ne estas poluita per proteino, DNA, jonoj kaj organikaj komponaĵoj.
Kit-komponantoj
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNazo-Libera ddH2O, DNA-Puriga Kolumno |
| RNA-Nur-Kolumno |
Trajtoj & avantaĝoj
■ Funkciado ĉe ĉambra temperaturo (15-25℃) dum la tuta procezo, sen glacia bano kaj malalta temperaturo centrifugado.
■ Kompleta ilaro RNase-Free, ne necesas zorgi pri RNA-degradado.
■ Aparte taŭga por la purigado de RNA el plantaj specimenoj de polisakaridoj kaj polifenoloj.
■ DNA-Puriga Kolumno specife ligas al DNA, tiel ke la ilaro povas forigi genoman DNA-poluadon sen aldoni DNazon.
■ Alta RNA-rendimento: nur RNA-Kolumno kaj unika formulo povas efike purigi RNA.
■ Rapida rapido: facile operaciebla kaj kompletigebla ene de 30 minutoj.
■ Sekureco: ne necesas organika reakciilo.
■ Alta kvalito: La purigitaj RNA-fragmentoj estas de alta pureco, liberaj de proteino kaj aliaj malpuraĵoj, kaj povas renkonti diversajn kontraŭfluajn eksperimentajn aplikojn.
Produktaj parametroj
■ Laŭfluaj aplikoj: unua-fadena cDNA-sintezo, RT-PCR, molekula klonado, Northern Blot, ktp.
■ Specimeno: Freŝaj aŭ frostigitaj plantaj histoj de polisakaridoj kaj polifenoloj
■ Dozo: 50mg planta histo
■ Maksimuma RNA-liga kapablo de puriga kolumno: 80 μg
■ Eluvvolumo: 50-200 μl
Kit-aplikaĵo
Ĝi taŭgas por eltiro kaj purigo de totala RNA el freŝaj aŭ frostaj planthistaj specimenoj (precipe freŝa planta folihisto) kun alta polisakarido kaj polifenola enhavo.
Laborfluo
Diagramo
Plant Total RNA Isolation Kit Plus prilaboris 50mg da freŝaj folioj de polisakaridoj kaj polifenoloj, kaj 5% purigita RNA estis testita per elektroforezo.
1: Banano
2: Ginko
3: Kotono
4: Granato
Stokado kaj Konsumodaŭro
Ĉi tiu ilaro povas esti konservita dum 24 monatoj sub sekaj kondiĉoj ĉe ĉambra temperaturo (15-25℃);se ĝi devas esti konservita por pli longa tempo, ĝi povas esti stokita en 2–8℃.
Buffer PSL1 povas esti metita je 4℃ dum 1 monato post aldonado de β-mercaptoetanol (oni rekomendas aldoni ĝin samtempe de eksperimento).
La kolono ŝtopiĝis
Post kiam la kolono ŝtopis, la RNA-rendimento estas reduktita aŭ eĉ neeble purigi la RNA, kaj la akirita RNA-maso estas malalta.
Analizo de komuna kaŭzo:
1. Specimaj paŭzoj ne estas ĝisfundaj.
Specimena rompo ne tute igas DNA-PURIDADKOLONON esti blokita, dum influas RNA-rendimenton kaj kvaliton.Ni rekomendas rapidan muelantan operacion en sufiĉa likva nitrogeno kiam vi rompis la specimenojn, Provu disbati la specimenan ĉelan muron, ĉelan membranon kaj aliajn histojn.Por plantaj specimenoj de poliolaj polisakaridoj, ni rekomendas, ke vi uzu Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Kiam suĉas la disigitan specimenan supernatanton per DNA-Puriga Kolumno, la ebla ĉelo fragmentita precipitaĵo povas esti enspirita.
La ĉelaj fragmentaj sedimentoj prenitaj kaŭzos la RNA-NUR-Kolumnon kiu estos blokita kiam la RNA-adsorbadoperacio estas farita (vidu la paŝon 6).Ni rekomendas vin zorge kiam suĉas ĉi tiun supernatanton por eviti ke ĉelaj derompaĵoj estu suĉitaj.
3. Ekzempla komenca kvanto estas tro multe.
Troa specimenuzokutimo rezultigos nekompletan specimenan fragmentiĝon aŭ nekompletan ĉellizon de Buffer PSL1, rezultigante blokadon de la purigkolono dum purigado.Plant Total RNA Isolation Kit Ĉiu unuopa purigita operacia specimeno estas 50 mg.Por plantaj specimenoj de poliolaj polisakaridoj, ni rekomendas, ke vi provu Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. La temperaturo de la centrifugilo estas tro malalta.
La tuta procezo de izolado kaj purigado de RNA estas efektivigita ĉe ĉambra temperaturo (20-25°C), krom ke la specimena histo estas rompita de likva nitrogeno. La temperaturo de iuj kriogenaj centrifugiloj estas pli malalta ol 20.℃, kiu povas kaŭzi blokadon de DNA-Puriga Kolumno kaj/aŭ RNA-Nur-Kolumno.Se tio okazas, agordu la centrifugan temperaturon al 20-25℃, kajcertigu, ke la liza miksaĵo kaj/aŭ la etanol-aldonita supernatante estis antaŭvarmigita al 37°C.
Neniu RNA ĉerpita aŭ RNA-rendimento estas malalta
Estas kutime multaj faktoroj kiuj influas la reakivan efikecon, kiel ekzemple: specimena RNA-enhavo, operaciometodo, la eluovolumeno, ktp.
Analizo de oftaj kaŭzoj kiel sube:
1.Glacia bano aŭ malalta temperaturo (4 °C) centrifugado estis farita dum la operacio.
Sugesto: Funkcii ĉe ĉambra temperaturo (15-25°C) en la tuta procezo, ne faru glacibanon kaj malaltan temperaturon centrifugadon.
2.La RNA estis degradita pro nedeca konservado de la specimeno aŭ longtempa konservado de la specimeno.
Rekomendo: La ĵus kolektitaj specimenoj devas esti rapide frostigitaj en likva nitrogeno, kaj poste konservitaj ĉe -80 °C dum longa tempo, evitu ripetan frostigon kaj degelon de specimenoj;aŭ tuj trempu la specimenojn en RNA-stabiligilo RNAlater solvo (bestaj specimenoj).
3.Nesufiĉa specimena fragmentiĝo kaj lizo kondukas al blokado de la puriga kolumno.
Sugesto: Muelante la histon, bonvolu certigi, ke la histo estas sufiĉe muelita, kaj rapide transdoni ĝin al la antaŭpreparita Buffer PSL1 (konfirmu, ke la ĝusta proporcio de β-ME estis aldonita, vidu la paŝon 1 de la proceduro).
4.La eluvaĵo estis aldonita malĝuste.
Sugesto: Certigu, ke RNase-Free ddH2O estas gutita en la mezon de la puriga kolumna membrano.
5.La ĝusta volumo de absoluta etanolo ne estis aldonita al Buffer PSL2 aŭ Buffer PRW2.
Sugesto: Bonvolu sekvi la instrukciojn, aldoni la ĝustan volumon de absoluta etanolo al Buffer PSL2 kaj Buffer PRW2 kaj miksi bone antaŭ ol la ilaro estas uzata.
6.La kvanto de histoprovaĵo estas netaŭga.
Sugesto: Uzu 50 mg da histo per 500 μl da Buffer PSL1.Uzi tro da histo reduktos la kvanton de RNA eltirita kaj la pureco de la rezulta RNA ankaŭ estos reduktita.Ni forte rekomendas, ke la komenca specimena dozo ne superu 50 mg per operacio de eltiro de RNA.
7.Malkonvena eluovolumo aŭ nekompleta elucio.
Sugesto: La eluiva volumo de la puriga kolumno estas 50-200 μl;se la elucia efiko ne estas kontentiga, oni rekomendas plilongigi la tempon ĉe ĉambra temperaturo post aldoni antaŭvarmigitan RNase-Free ddH2O, kiel 5-10min.
8.La puriga kolumno havas etanolan restaĵon post lavado kun BufferPRW2.
Sugesto: Se la malplena tubo estas centrifugata dum 1 minuto kaj ankoraŭ restas etanolo post lavado en Buffer PRW2, vi povas pliigi la tempon de la malplena tubo centrifugado al 2 minutoj, aŭ meti la purigan kolumnon ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por plene forigi la restan etanolon.
9.La ilaro estis uzata malĝuste.
Sugesto: Por plantprovaĵoj de polifenolaj polisakaridoj, uzante oftajn ilarojn kiel Plant Total RNA Isolation Kit eble ne povas akiri idealajn RNA-provaĵojn.Ni rekomendas al vi uzi Plant Total RNA IsolationKit Plus, kiu estas speciale desegnita por polifenolaj polisakaridaj plantprovaĵoj.Ilaro speciale evoluigita por ĉerpi RNA de polifenolo kaj polisakaridaj plantprovaĵoj.
OD260/OD280-valoro estas malalta
RNA-eluo kun ddH2O kaj uzita por spektrofotometro-valoroj rezultigas malaltajn OD260/OD280-valorojn.Ni rekomendas uzi 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (prefere ol RNase-Free ddH2O por eligi RNA) por akiri relative ĝustajn OD260/OD280-valorojn, vidu "RNA-Koncentriĝo kaj Purigado-Analizoj" sur paĝo 19.
La purigita RNA estas degradita
La kvalito de purigita RNA estas rilatita al faktoroj kiel ekzemple specimenkonservado, RNase-poluado, kaj manipulado.
Analizo de oftaj kaŭzoj:
1.Tissue specimenoj ne estis stokitaj en tempo post kolekto.
Rekomendo: Se la histoprovaĵoj ne estas uzataj ĝustatempe post kolekto, bonvolu stoki ilin en likva nitrogeno je malalta temperaturo tuj aŭ transdoni ilin al -80 °C por longdaŭra konservado post rapida frosto en likva nitrogeno, aŭ tuj mergi la specimenojn en RNA-stabiligilo RNAlater solvo (bestaj specimenoj).Por RNA-eltiro, provu uzi ĵus kolektitajn histajn specimenojn.
2.Ripeta frostado kaj degelo de histoprovaĵoj.
Sugesto: Dum stokado de histoprovaĵoj, estas plej bone tranĉi ilin en malgrandajn pecojn por konservado, kaj elpreni parton de ili kiam ili uzas ilin por eviti la degeneron de RNA kaŭzita de ripeta frosto kaj degelo de la specimenoj.
3.RNase estas enkondukita en la operacioĉambro aŭ ne portataj foruzeblaj gantoj, maskoj, ktp.
Sugesto: RNA-eltiradaj eksperimentoj estas plej bone faritaj en apartaj RNA-operacioj, kaj la laboratoriotablo devas esti purigita antaŭ la eksperimento, kaj foruzeblaj gantoj kaj maskoj devus esti portitaj dum la eksperimento por eviti RNA-degeneron kaŭzitan de la enkonduko de RNazo laŭ la plej granda mezuro.
4.La reakciilo estas poluita de RNase dum uzo.
Sugesto: Anstataŭigi per nova serio de plant-totala RNA-ekstrakta ilaro por rilataj eksperimentoj.
5.La centrifugilaj tuboj kaj pipetaj pintoj uzataj por RNA-manipulado estas poluitaj per RNase.
Sugesto: Certigu, ke la centrifugilaj tuboj, pipetpintoj, pipetoj ktp uzataj en RNA-eltiro estas ĉiuj RNase-Libre.
Instrukciaj Manlibroj:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus Instrukcia Manlibro
