Foreasy HS Taq DNA Polymerase
Ilaro Priskribo:
◮Alta specifeco: La enzimo kun alta varma-komenca agado.
◮Rapida Plifortigo: 10 sek/kb.
◮Alta ŝablona adaptebleco : povas esti uzata por efike plifortigi AltaGCvalorokajdiversaj malfacile pligrandigeblaj DNA-ŝablonoj.
◮Forta fideleco: La fideleco estas 6 fojojnof ordinara Taq-enzimo.
Priskribo
Foreasy HS Taq DNA Polymerase estas nova Taq-enzimo esprimita en Escherichia coli-inĝenieraj bakterioj per gena rekombinigteknologio.Post kiam la enzimo estas traktita per speciala procezo, ĝi's-agado estas malhelpata antaŭ termika aktivigo, tiel malhelpante la nespecifan plifortigon kaŭzitan de la nespecifa kalciado de enkondukoj aŭ enkondukaj dimeroj sub malaltaj temperaturoj.Ĉi tiu produkto taŭgas por tre specifa PCR Reactjono, Multoblaj x PCR , alta GC enhavo (> 60%) ,kunsekundara strukturoaŭ aliaforta fona genomoikojplifortigo kaj grandskala genaroikojdetekto de plifortigo.La enzimo havas 5' → 3' DNA-polimerazian agadon kaj 5' → 3' eksonukleazaktivecon, sed neniun 3' → 5' eksonukleazaktivecon.
Kit-komponantoj
| Komponanto | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA-polimerazo (5 U/μL) | 5000 U (1 ml) | 50 KU (10 ml) | 500 KU (100 ml) |
| 2× Taq Reag Buffer | 25 ml × 5 | 250 ml × 5 | 500 ml × 25 |
Trajtoj & avantaĝoj
- Alta specifeco: La enzimo kun alta varma-komenca agado.
- Rapida Plifortigo: 10 sek/kb.
- Alta ŝablona adaptebleco: povas esti uzata por efike plifortigi AltaGCvalorokajdiversaj malfacile pligrandigeblaj DNA-ŝablonoj.
- Forta fideleco: La fideleco estas 6 fojojnof ordinara Taq-enzimo.
Kit-aplikaĵo
- Diversaj PCR/qPCR-sistemo kaj rekta PCR-sistemo
- PCR Amplifita DNA-Fragmento
- DNA-marko
- Sekvencado de DNA
- PCR plus A vosto
Difino de aktiveco
1U : La kvanto de enzimo necesa por enkorpigi 10 nmol deDNAen acid-nesolveblan materion uzante aktivigitan salmosperman DNA kiel ŝablonon / enkondukon, 74 °C, 30 minutojn.
Reagkondiĉo
| Temperaturo | Tempo de Reago | Cikla tempo |
| 37°C | 5 min | 1 |
| 94°C | 5 min | 1 |
| 94°C | 10 Sek | 40 |
| 60°C | 10 Sek |
Notu:Por 10 µL kaj 20 µL sistemoj, aldonu egalan volumenon da minerala oleo se la termociklilo ne havas varmegan kovrilon.
PCR-reagkondiĉoj varias dependi de la strukturaj kondiĉoj de ŝablonoj, enkondukoj, kaj similaj.En la specifa operacio, estas necese desegni la optimumajn reagkondiĉojn, inkluzive de kalcia temperaturo, etendtempo, ktp., laŭ la specifaj kondiĉoj kiel ekzemple la ŝablono tipo, la grandeco de la cela fragmento, la baza sekvenco de la plifortigita fragmento, kaj la GC enhavo kaj longeco de la enkonduko.
Stokado
-20 ± 5 °C dum 2 jaroj aŭ je -80 °C por longdaŭra konservado.
Neniuj plifortigaj signaloj
1.La Taq DNA Polymerase en la ilaro perdas sian agadon pro netaŭga stokado aŭ eksvalidiĝo de la ilaro.
Rekomendo: Konfirmu la konservajn kondiĉojn de la ilaro;realdonu taŭgan kvanton da Taq DNA Polymerase al la PCR-sistemo aŭ aĉetu novan Real Time PCR Kit por rilataj eksperimentoj.
2.Estas multaj inhibitoroj de Taq DNA Polymerase en la DNA-ŝablono.
Sugesto: Repurigu la ŝablonon aŭ malpliigu la kvanton de uzata ŝablono.
3.La koncentriĝo de Mg2+ ne taŭgas.
Rekomendo: La koncentriĝo de Mg2+ de la 2× Reala PCR-Miksaĵo, kiun ni provizas, estas 3.5mM.Tamen, por kelkaj specialaj enkondukoj kaj ŝablonoj, la Mg2+ koncentriĝo povas esti pli alta.Tial vi povas rekte aldoni MgCl2 por optimumigi la koncentriĝon de Mg2+.Oni rekomendas pliigi la Mg2+ 0.5mM ĉiufoje por optimumigo.
4.La kondiĉoj de plifortigo de PCR ne taŭgas, kaj la enkonduka sekvenco aŭ koncentriĝo ne taŭgas.
Sugesto: konfirmu la ĝustecon de la enkonduka sekvenco kaj la enkonduko ne estis degradita;se la plifortiga signalo ne estas bona, provu malaltigi la kalson-temperaturon kaj ĝustigi la enkondukan koncentriĝon taŭge.
5.La kvanto de ŝablono estas tro malgranda aŭ tro multe.
Rekomendo: Faru ŝablonan linearigigan gradient-diluadon, kaj elektu la ŝablonan koncentriĝon kun la plej bona PCR-efiko por Reala Tempo PCR-eksperimento.
NTC havas tro altan fluoreskecvaloron
1.Reagent-poluado kaŭzita dum operacio.
Rekomendo: Anstataŭigi per novaj reakciiloj por Real Time PCR-eksperimentoj.
2.Kontaminado okazis dum la preparado de la PCR-reaga sistemo.
Rekomendo: Prenu necesajn protektajn rimedojn dum operacio, kiel: porti lateksoogantojn, uzi pipetpinton kun filtrilo ktp.
3.La enkondukoj estas degraditaj, kaj la degenero de la enkondukoj kaŭzos nespecifan plifortigon.
Sugesto: Uzu SDS-PAGE elektroforezon por detekti ĉu la enkondukoj estas degraditaj, kaj anstataŭigi ilin per novaj enkondukoj por Real Time PCR-eksperimentoj.
Unua dimero aŭ nespecifa plifortigo
1.La koncentriĝo de Mg2+ ne taŭgas.
Rekomendo: La koncentriĝo de Mg2+ de la 2× Real PCR EasyTM Mix, kiun ni provizas, estas 3.5 mM.Tamen, por kelkaj specialaj enkondukoj kaj ŝablonoj, la Mg2+ koncentriĝo povas esti pli alta.Tial vi povas rekte aldoni MgCl2 por optimumigi la koncentriĝon de Mg2+.Oni rekomendas pliigi la Mg2+ 0.5mM ĉiufoje por optimumigo.
2.The PCR annealing temperaturo estas tro malalta.
Sugesto: Pliigu la PCR-anneadan temperaturon je 1℃ aŭ 2℃ ĉiufoje.
3.La PCR-produkto estas tro longa.
Rekomendo: La daŭro de la produkto Real Time PCR devus esti inter 100-150bp, ne pli ol 500bp.
4.La enkondukoj estas degraditaj, kaj la degenero de la enkondukoj kondukos al la apero de specifa plifortigo.
Sugesto: Uzu SDS-PAGE elektroforezon por detekti ĉu la enkondukoj estas degraditaj, kaj anstataŭigi ilin per novaj enkondukoj por Real Time PCR-eksperimentoj.
5.La PCR-sistemo estas netaŭga, aŭ la sistemo estas tro malgranda.
Sugesto: La PCR-reaga sistemo estas tro malgranda kaŭzos la detektan precizecon malpliiĝi.Plej bone estas uzi la reagsistemon rekomenditan de la kvanta PCR-instrumento por refari la Real Time PCR-eksperimenton.
Malbona ripeteblo de kvantaj valoroj
1.La instrumento misfunkcias.
Sugesto: Povas ekzisti eraroj inter ĉiu PCR-truo de la instrumento, rezultigante malbonan reprodukteblecon dum temperaturadministrado aŭ detekto.Bonvolu kontroli laŭ la instrukcioj de la responda instrumento.
2.La specimena pureco ne estas bona.
Rekomendo: Malpuraj specimenoj kondukos al malbona reproduktebleco de la eksperimento, kiu inkluzivas la purecon de la ŝablono kaj enkondukoj.Plej bone estas repurigi la ŝablonon, kaj la enkondukoj estas plej bone purigitaj per SDS-PAGE.
3.La tempo de preparado kaj konservado de PCR-sistemo estas tro longaj.
Sugesto: Uzu la Realtempan PCR-sistemon por PCR-eksperimento tuj post preparado, kaj ne lasu ĝin flanken tro longe.
4.La kondiĉoj de plifortigo de PCR ne taŭgas, kaj la enkonduka sekvenco aŭ koncentriĝo ne taŭgas.
Sugesto: konfirmu la ĝustecon de la enkonduka sekvenco kaj la enkonduko ne estis degradita;se la plifortiga signalo ne estas bona, provu malaltigi la kalson-temperaturon kaj ĝustigi la enkondukan koncentriĝon taŭge.
5.La PCR-sistemo estas netaŭga, aŭ la sistemo estas tro malgranda.
Sugesto: La PCR-reaga sistemo estas tro malgranda kaŭzos la detektan precizecon malpliiĝi.Plej bone estas uzi la reagsistemon rekomenditan de la kvanta PCR-instrumento por refari la Real Time PCR-eksperimenton.
