Gvidiloj por analizo de problemoj

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Neniu RNA povas esti eltirita aŭ la rendimento de nuklea acido estas malalta

Estas kutime multaj faktoroj kiuj influas reakivan efikecon, kiel ekzemple: specimena RNA-enhavo, metodo de operacio, eluovolumeno, ktp.

Analizo de oftaj kaŭzoj:

1.Glacia bano aŭ malalta temperaturo (4 ° C) centrifugado dum operacio.

Sugesto: Ĉambra temperaturo (15-25 °C) operacio, neniam glacia bano kaj malalta temperaturo centrifugilo.

2. Nedeca specimena konservado aŭ specimena stokado tro longe.

Sugesto: Konservu specimenojn ĉe -80 ° C aŭ frostiĝu en likva nitrogeno, kaj evitu ripetan frostig-degelon;provu uzi ĵus kolektitajn specimenojn por RNA-eltiro.

3.Nesufiĉa specimena lizo

Rekomendo: Bonvolu certigi, ke la specimeno kaj la laborsolvo (Linia Akrilamido) estas plene miksitaj kaj kovataj dum 10 minutoj ĉe ĉambra temperaturo (15-25 °C)

4.La eluvaĵo estis aldonita malĝuste

Rekomendo: Certigu, ke RNase-Free ddH2O estas aldonita al la mezo de la membrano de la puriga kolono.

5.Malpropra volumo de anhidra etanolo en Buffer viRW2

Sugesto: Bonvolu sekvi la instrukciojn, aldoni la ĝustan volumon de anhidra etanolo al Buffer viRW2 kaj miksi ilin bone antaŭ uzi la ilaron.

6.Improper specimena uzado.

Sugesto: 200μl de specimeno po 500μl de Buffer viRL.Troa specimena volumeno rezultos en reduktita RNA-eltira indico.

7.Improper elucio-volumo aŭ nekompleta elucio.

Sugesto: La eluiva volumo de la puriga kolumno estas 30-50μl;se la elucia efiko ne estas kontentiga, oni rekomendas aldoni antaŭvarmigitan RNase-Free ddH.₂O kaj plilongigi la tempon metante ĉe ĉambra temperaturo, kiel 5-10min

8.Purification-kolumno havas etanolan restaĵon post lavado en Buffer viRW2.

Sugesto: Se etanolo ankoraŭ restas post lavado en Buffer viRW2 kaj malplena-tuba centrifugado dum 2 minutoj, la puriga kolumno povas esti lasita ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj post malplena-tuba centrifugado por plene forigi restantan etanolon.

La degenero de purigitaj RNA-molekuloj

La kvalito de la purigita RNA estas rilatita al faktoroj kiel ekzemple provaĵostokado, RNase-poluado, kaj operacio.

Analizo de oftaj kaŭzoj:

1.La kolektitaj specimenoj ne estis konservitaj ĝustatempe.

Sugesto: Se la specimeno ne estas uzata ĝustatempe post kolekto, bonvolu konservi ĝin je -80 ℃ aŭ likva nitrogeno tuj.Por eltiro de RNA-molekuloj, provu uzi ĵus kolektitajn specimenojn kiam ajn eblas.

2.Kolektitaj specimenoj frostiĝis kaj degelis ree.

Sugesto: Evitu ripetan frostiĝon kaj degelon (ne pli ol unufoje) dum specimena kolekto kaj konservado, alie la rendimento de nuklea acido malpliiĝos.

3.RNase estis enkondukita en la operaciejo aŭ neniuj forĵeteblaj gantoj, maskoj ktp estis portitaj.

Sugesto: La eltiro de RNA-molekuloj-eksperimento estas plej bone farita en aparta RNA-operaciejo, kaj la eksperimenta tablo estas purigita antaŭ la eksperimento.Portu foruzeblajn gantojn kaj maskojn dum la eksperimento por eviti RNA-degeneron kaŭzitan de enkonduko de RNase.

4.La reakciilo estas poluita de RNase dum la uzo.

Sugesto: Anstataŭigi per nova Viral RNA-Izola Ilaro por rilataj eksperimentoj.

5.La RNase-poluado de la centrifugiltuboj, pipetpintoj, ktp. Sugesto: Certiĝu, ke la centrifugiltuboj, pipetpintoj kaj pipetoj estas ĉiuj RNase-Liberaj.

La purigitaj RNA-molekuloj influis kontraŭfluajn eksperimentojn

La RNA-molekuloj purigitaj de la puriga kolono influos kontraŭfluajn eksperimentojn se estas tro da salaj jonoj aŭ proteinoj, kiel: inversa transskribo, Northern Blot, ktp.

1.Estas ceteraj salaj jonoj en la eluitaj RNA-molekuloj.

Rekomendo: Certigu, ke la ĝusta volumeno de anhidra etanolo estis aldonita al Buffer viRW2, kaj lavu la purigan kolumnon dufoje laŭ la ĝusta centrifuga rapido laŭ la operaciaj instrukcioj；Se ankoraŭ restas salaj jonoj, vi povas aldoni Buffer viRW2 al la puriga kolumno, kaj lasi ĝin ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj.Poste faru centrifugadon por forigi salajn jonojn poluadon en la plej granda mezuro

2.Estas restanta etanolo en la eluitaj RNA-molekuloj

Sugesto: unufoje konfirmante, ke purigaj kolumnoj estis lavitaj de Buffer viRW2, faru malplenan tuban centrifugon laŭ la centrifuga rapido sur la operaciaj instrukcioj.Se ankoraŭ restas etanolo, ĝi povas esti lasita dum 5 minutoj ĉe ĉambra temperaturo post malplena-tuba centrifugado por forigi la restantan etanolon laŭ la plej granda mezuro.

Instrukciaj Manlibroj:

Viral RNA-Izola Ilaro Instrukcia Manlibro