Escherichia Coli O157: H7 Nucleic Acid Detection Kit (PCR Fluorescent Probe Method/Liofiligo)
Ilaro Priskribo:
Kato.Ne.FP103
Ĝi estas uzata por rapida detekto kaj ekzamenado de E. coli O157:H7 en manĝaĵo, furaĝo, akvoprovaĵoj kaj mediaj specimenoj.
Priskriboj
Ĝi estas uzata porrapida detekto kaj ekzamenado de E. coli O157:H7 en manĝaĵoj, furaĝo, akvoprovaĵoj kaj mediaj specimenoj.
[Testa principo]
Laŭ la principo de fluoreska PCR-teknologio, specifaj enkondukoj kaj Taqman-sondiloj estas dezajnitaj por la specifa geno de Escherichia coli O157: H7, kaj detektitaj per fluoreska PCR-instrumento, por realigi la detekton de Escherichia coli O157: H7 Kvalita detekto de DNA.
Kit Enhavo
Noto: ROX-kanala sondilo ne estas inkluzivita.
| Ckomponantoj | Specifo | Qkvanto |
| Bufro A | Tubo | 1 |
| Bufro B | Tubo | 1 |
| Pozitiva kontrolo | Tubo | 1 |
| Negativa kontrolo | Tubo | 1 |
Atendita Uzado
Ĝi estas uzata por rapida detekto kaj ekzamenado de E. coli O157:H7 en manĝaĵoj, furaĝo, akvoprovaĵoj kaj mediaj specimenoj.
Kondiĉoj de Stokado Kaj Eksvalidiĝo
Konservu je -20 ℃ en la mallumo kaj evitu ripetan frostiĝon kaj degelon.
La valideca periodo estas 12monatoj, kaj la produktodato estas montrita sur la ekstera pakaĵo.
Instrumentoj Kaj Konsumeblaj
Fluoreska kvanta PCR-instrumento, pipetpafilo kaj kongruaj konsiletoj, vortica skuilo, mini centrifugilo.
Uzado
1. Specimena Pretigo
1.1 Specimena tipo: Ĉi tiu ilaro taŭgas por specimenoj de manĝaĵo, nutrado, akvo kaj aliaj specimenoj suspektitaj esti poluitaj de Escherichia coli O157:H7.Por profunde prilaboritaj karnaj produktoj, trinkaĵoj kaj aliaj substancoj enhavantaj pigmentojn, ili devas esti lavitaj por eviti tuŝi la fluoreskecan signalkolekton.
1.2 Specimena prilaborado: Riferu al "GB 4789.10-2016 Manĝaĵo Sekureco Nacia Norma Manĝaĵo Mikrobiologia Ekzameno de Escherichia coli O157: H7 Testo" por specimena preparado, riĉiga kulturo kaj izolado de Escherichia coli O157: H7.
- Neltiro de ukleika acido
Prenu 20 mL da riĉiga solvaĵo en 1,5 mL centrifugiltubon, aldonu 200 μL da mikroba lisato (aldona ilaro necesas), vortigi dum 30 sekundoj, centrifugu mallonge kaj flankenmetite.
Rimarkoj: La eltiro de nuklea acido el la lisato devas esti finita ene de 10 minutoj, kaj ne povas esti konservita dum longa tempo.
3. Plifortigo de Nuklea Acido
3.1 Enŝaltu la fluoreskan kvantan PCR-instrumenton por uzo.
Buffer A kaj Buffer B el la ilaro, fandu ilin plene, kaj centrifugu mallonge.Aldonu 18 μL Buffer A kaj 2 μL Buffer B al ĉiu PCR-reaktubo.Poste aldonu 5 mL ĉiun el la negativa kontrolo, ĉerpita nuklea acido kaj pozitiva kontrolo en PCR-reagajn tubojn, kovru la tubojn kaj centrifugu mallonge.
3.3 Transloku la PCR-reagan tubon al fluoreska PCR-maŝino, kaj uzu la jenajn procedurojn por fari plifortigajn eksperimentojn: elektu 25 mL por la reagsistemo, kolektu fluoreskecajn signalojn je 60 °C por ĉiu ciklo, kaj elektu FAM por la detekta kanalo.
| Paŝo | Programo | Nombro de cikloj |
| 1 | 37 ℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (kolektu fluoreskecon) |
Gvidiloj por analizo de problemoj
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Neniu RNA povas esti eltirita aŭ la rendimento de nuklea acido estas malalta
Estas kutime multaj faktoroj kiuj influas reakivan efikecon, kiel ekzemple: specimena RNA-enhavo, metodo de operacio, eluovolumeno, ktp.
Analizo de oftaj kaŭzoj:
1.Glacia bano aŭ malalta temperaturo (4 ° C) centrifugado dum operacio.
Sugesto: Ĉambra temperaturo (15-25 °C) operacio, neniam glacia bano kaj malalta temperaturo centrifugilo.
2. Nedeca specimena konservado aŭ specimena stokado tro longe.
Sugesto: Konservu specimenojn ĉe -80 ° C aŭ frostiĝu en likva nitrogeno, kaj evitu ripetan frostig-degelon;provu uzi ĵus kolektitajn specimenojn por RNA-eltiro.
3.Nesufiĉa specimena lizo
Rekomendo: Bonvolu certigi, ke la specimeno kaj la laborsolvo (Linia Akrilamido) estas plene miksitaj kaj kovataj dum 10 minutoj ĉe ĉambra temperaturo (15-25 °C)
4.La eluvaĵo estis aldonita malĝuste
Rekomendo: Certigu, ke RNase-Free ddH2O estas aldonita al la mezo de la membrano de la puriga kolono.
5.Malpropra volumo de anhidra etanolo en Buffer viRW2
Sugesto: Bonvolu sekvi la instrukciojn, aldoni la ĝustan volumon de anhidra etanolo al Buffer viRW2 kaj miksi ilin bone antaŭ uzi la ilaron.
6.Improper specimena uzado.
Sugesto: 200μl de specimeno po 500μl de Buffer viRL.Troa specimena volumeno rezultos en reduktita RNA-eltira indico.
7.Improper elucio-volumo aŭ nekompleta elucio.
Sugesto: La eluiva volumo de la puriga kolumno estas 30-50μl;se la elucia efiko ne estas kontentiga, oni rekomendas aldoni antaŭvarmigitan RNase-Free ddH.2O kaj plilongigi la tempon metante ĉe ĉambra temperaturo, kiel 5-10min
8.Purification-kolumno havas etanolan restaĵon post lavado en Buffer viRW2.
Sugesto: Se etanolo ankoraŭ restas post lavado en Buffer viRW2 kaj malplena-tuba centrifugado dum 2 minutoj, la puriga kolumno povas esti lasita ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj post malplena-tuba centrifugado por plene forigi restantan etanolon.
La degenero de purigitaj RNA-molekuloj
La kvalito de la purigita RNA estas rilatita al faktoroj kiel ekzemple provaĵostokado, RNase-poluado, kaj operacio.
Analizo de oftaj kaŭzoj:
1.La kolektitaj specimenoj ne estis konservitaj ĝustatempe.
Sugesto: Se la specimeno ne estas uzata ĝustatempe post kolekto, bonvolu konservi ĝin je -80 ℃ aŭ likva nitrogeno tuj.Por eltiro de RNA-molekuloj, provu uzi ĵus kolektitajn specimenojn kiam ajn eblas.
2.Kolektitaj specimenoj frostiĝis kaj degelis ree.
Sugesto: Evitu ripetan frostiĝon kaj degelon (ne pli ol unufoje) dum specimena kolekto kaj konservado, alie la rendimento de nuklea acido malpliiĝos.
3.RNase estis enkondukita en la operaciejo aŭ neniuj forĵeteblaj gantoj, maskoj ktp estis portitaj.
Sugesto: La eltiro de RNA-molekuloj-eksperimento estas plej bone farita en aparta RNA-operaciejo, kaj la eksperimenta tablo estas purigita antaŭ la eksperimento.Portu foruzeblajn gantojn kaj maskojn dum la eksperimento por eviti RNA-degeneron kaŭzitan de enkonduko de RNase.
4.La reakciilo estas poluita de RNase dum la uzo.
Sugesto: Anstataŭigi per nova Viral RNA-Izola Ilaro por rilataj eksperimentoj.
5.La RNase-poluado de la centrifugiltuboj, pipetpintoj, ktp. Sugesto: Certiĝu, ke la centrifugiltuboj, pipetpintoj kaj pipetoj estas ĉiuj RNase-Liberaj.
La purigitaj RNA-molekuloj influis kontraŭfluajn eksperimentojn
La RNA-molekuloj purigitaj de la puriga kolono influos kontraŭfluajn eksperimentojn se estas tro da salaj jonoj aŭ proteinoj, kiel: inversa transskribo, Northern Blot, ktp.
1.Estas ceteraj salaj jonoj en la eluitaj RNA-molekuloj.
Rekomendo: Certigu, ke la ĝusta volumeno de anhidra etanolo estis aldonita al Buffer viRW2, kaj lavu la purigan kolumnon dufoje laŭ la ĝusta centrifuga rapido laŭ la operaciaj instrukcioj；Se ankoraŭ restas salaj jonoj, vi povas aldoni Buffer viRW2 al la puriga kolumno, kaj lasi ĝin ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj.Poste faru centrifugadon por forigi salajn jonojn poluadon en la plej granda mezuro
2.Estas restanta etanolo en la eluitaj RNA-molekuloj
Sugesto: unufoje konfirmante, ke purigaj kolumnoj estis lavitaj de Buffer viRW2, faru malplenan tuban centrifugon laŭ la centrifuga rapido sur la operaciaj instrukcioj.Se ankoraŭ restas etanolo, ĝi povas esti lasita dum 5 minutoj ĉe ĉambra temperaturo post malplena-tuba centrifugado por forigi la restantan etanolon laŭ la plej granda mezuro.
Instrukciaj Manlibroj:
Viral RNA-Izola Ilaro Instrukcia Manlibro
