Ni estis sperta fabrikanto.Gajnante la plimulton en la decidaj atestoj de sia merkato por Granda rabatado Ĉinio Alta Sensiveca Unupaŝa Sondilo Rt-QpcrKit V2, Kvalito estas la vivo de fabriko, Fokuso sur postulo de kliento estas la fonto de supervivo kaj disvolviĝo de la kompanio, Ni aliĝas al honesteco kaj bona kredo laboranta sinteno, antaŭĝojas vian venon!
Ni estis sperta fabrikanto.Gajnante la plimulton en la decidaj atestoj de sia merkato porĈinio Taq DNA-polimerazo, Qpcr, Nia kompanio promesas: raciaj prezoj, mallonga tempo de produktado kaj kontentiga post-venda servo, ni ankaŭ bonvenigas vin viziti nian fabrikon kiam ajn vi volas.Deziru nun, ke ni havu agrablan kaj longperspektivan komercon kune!!!

Priskriboj

Ĉi tiu ilaro uzas unikan lizbufrsistemon, kiu povas rapide liberigi RNA de kulturitaj ĉelprovaĵoj por RT-qPCR-reagoj, tiel forigante la tempopostulan kaj penigan RNA-purigan procezon.La RNA-ŝablono povas esti akirita en nur 7 minutoj.La reakciiloj 5×Direct RT Mix kaj 2×Direct qPCR Mix-SYBR provizitaj de la ilaro povas rapide kaj efike akiri realtempajn kvantajn PCR-rezultojn.

5×Direct RT Mix kaj 2×Direct qPCR Mix-SYBR havas fortan inhibitoran toleremon, kaj la lisato de la specimenoj povas esti uzata kiel ŝablono por RT-qPCR rekte.Ĉi tiu ilaro enhavas la unikan RNA-alt-afinecan Foregene inversan transkriptazon, kaj Hot D-Taq DNA-polimerazon, dNTPojn, MgCl.₂, reagbufro, PCR-optimumiganto kaj stabiligilo.

Specifoj

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Kit-komponantoj

Trajtoj & avantaĝoj

■ Simpla kaj efika: kun Cell Direct RT-teknologio, RNA-provaĵoj povas esti akiritaj en nur 7 minutoj.

■ La specimena postulo estas malgranda, tiel malalta kiel 10 ĉeloj povas esti provitaj.

■ Alta rendimento: ĝi povas rapide detekti RNA en ĉeloj kultivitaj en 384, 96, 24, 12, 6-putoplatoj.

■ DNA Eraser povas rapide forigi liberigitajn genarojn, multe redukti la efikon al postaj eksperimentaj rezultoj.

■ Optimumigita RT kaj qPCR-sistemo igas la du-ŝtupan RT-PCR-inversan transskribon pli efika kaj PCR pli specifa, kaj pli imuna al RT-qPCR-reakinhibitoroj.

Kit-aplikaĵo

Amplekso de apliko: kulturitaj ĉeloj.

- RNA liberigita per specimena lizo: nur aplikebla al la ŝablono RT-qPCR de ĉi tiu ilaro.

- La ilaro povas esti uzata por la sekvaj celoj: analizo de genesprimo, konfirmo de siRNA-mediata gena silentiga efiko, ekzamenado de drogoj ktp.

Diagramo

Stokado kaj Konsumodaŭro

Parto I de ĉi tiu ilaro devas esti stokita ĉe 4℃;Parto II devas esti stokita ĉe -20 ℃.

Foregene Protease Plus II devas esti stokita je 4℃, ne frostigu je -20℃.

Reakciilo 2×Direct qPCR Mix-SYBR devas esti stokita ĉe -20℃ en la mallumo;se uzata ofte, ĝi ankaŭ povas esti stokita je 4℃ por mallongdaŭra konservado (uzu ene de 10 tagoj). Ni estas spertaj fabrikantoj.Gajni la plimulton en la decidaj atestoj de sia merkato por Granda rabatado Ĉinio Alta Sensiveca Unupaŝa Sondilo Rt-Qpcr Kit V2, Kvalito estas la vivo de fabriko, Fokuso sur postulo de kliento estas la fonto de supervivo kaj disvolviĝo de la kompanio, Ni aliĝas al honesteco kaj bona fido laboranta sinteno, antaŭĝojas vian venon!
Granda rabatadoĈinio Taq DNA-polimerazo, Qpcr, Nia kompanio promesas: raciaj prezoj, mallonga tempo de produktado kaj kontentiga post-venda servo, ni ankaŭ bonvenigas vin viziti nian fabrikon kiam ajn vi volas.Deziru nun, ke ni havu agrablan kaj longperspektivan komercon kune!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Taqman

Kat.No.DRT-01021/01022

Por ĉelo rekta RT-qPCR uzante ≤ 1000,000 ĉelojn

Produkta enkonduko

Ĉi tiu produkto uzas unikan lizan bufran sistemon por rapide liberigi RNA el kulturitaj ĉelaj specimenoj por RT-qPCR-reagoj, forigante la temporaban kaj penigan RNA-purigan procezon, kaj nur 7 minutojn por akiri la bezonatan RNA-ŝablonon, kun la 5× Rekta RT-Miksaĵo, 2× Rekta qPCR-Miksaĵo-Taqman provizita de la ilaro povas rapide kaj efike akiri rezultojn de PCR rapide kaj kvante.

5× Rekta RT-Miksaĵo kaj 2× Rekta qPCR-Miksaĵo-Taqman havas fortan inhibitoran toleremon kaj povas elfari efikan inversigon kaj specifan plifortigon uzante la lizaton de la specimeno por esti mezurita kiel ŝablono.La reakciilo enhavas Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂, Reago-Buffer, PCR-Optimizilo kaj Stabiligilo, kiu povas esti uzata kun lizo-bufro por rapide kaj facile detekti specimenojn, kaj havas la karakterizaĵojn de alta sentemo, specifeco kaj stabileco.

Produktaj trajtoj

Simpla, efika Cell Direct RT-teknologio, kiu daŭras eĉ 7 minutojn por akiri RNA-specimenojn.

Specimenpostuloj estas malgrandaj, kaj minimumo de 10 kulturitaj ĉeloj povas esti uzitaj por eksperimentado.

Alta trafluo por rapida RNA-akiro de kulturitaj ĉeloj kiel ekzemple 384, 96, 24, 12, kaj 6-putaj platoj.

DNA Eraser povas rapide forigi liberigitajn genarojn, tre reduktante la efikon al postaj eksperimentaj rezultoj.

Optimumigitaj RT- kaj qPCR-sistemoj ebligas du-paŝan RT-PCR kun pli efika inversa transskribo, specifeco, kaj pli forta RT-qPCR-reaga inhibitortoleremo.

Kit-aplikaĵo

Amplekso de apliko: Kulturitaj ĉeloj.

Specimena lizo interpretita RNA: uzata nur kiel du-ŝtupa RT-qPCR-ŝablono.

Ilaroj povas esti uzataj por la sekvaj celoj: gena reguliga esprimo-analizo, aleltestado, drogkribrado, ktp.

Limigoj de kit

Plifortigitaj fragmentoj ≤ 300 bp.

Ilaroj estas uzataj por freŝe kulturi ĉelojn.

Kontrolo de kvalito de produkto

Laŭ la Totala Kvalita Administra Sistemo de FOREGENE, ĉiu aro de Cell Direct RT-qPCR-serio ilaroj estas rigore provita plurfoje por certigi la fidindecon kaj stabilecon de la kvalito de ĉiu aro da ilaroj.

Enhavo de ilaro

*:Ĉela Lizo, 5×Rekta RT-Miksaĵo, 2× Rekta qPCR-Miksaĵo-Taqman aĉeteblas aparte, detaloj estas donitaj en Apendico 1 (PAĜO 13).

Kondiĉoj de konservado

1. Sendaj Kondiĉoj

La tuta procezo de transportado de glacipakaĵo de malalta temperaturo, por certigi, ke la ilaro estas en la stato <4 °C.

2. Kondiĉoj de konservado

Konservu parton I je 4 °C kaj Parton II je -20 °C.

La Foregene Protease Plus II devas esti stokita je 4 °C, ne frostita je -20 °C.

Reakciilo 2× Rekta qPCR Mix-Taqman estas stokita je -20 °C, aŭ je 4 °C por mallongdaŭra uzo se uzata ofte (ene de 10 tagoj).

Informoj pri komponantoj

Buffer CL: Disponigas la medion necesan por ĉelaj lizaj reagoj.

Buffer ST: Finigas la aktivan substancon en la lisato por eviti efikojn al posta RT.

DNA Eraser: DNA-forigilo, la efiko de forigado de la genaro sur postaj eksperimentoj.

5× Rekta RT-Miksaĵo: Enhavas altan RNA-afinecon Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, dNTPojn, stabiligilojn, plibonigojn, optimumigilojn kaj inversan transskribajn enkondukojn por optimuma vicigo (Hazarda Primer, Oligo(dT)₁₈Primer).

Foregene Protease Plus II: En la kunteksto de lizobufro, ĉeloj estas lizitaj por liberigi nukleajn acidojn.

2× Rekta qPCR Mix-Taqman: Ĉi tiu reakciilo enhavas Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPojn, MgCl₂, reagbufro, PCR-optimumiganto, kaj stabiligilo.

20× ROX-Referenca Tinkturo: Ĝenerale uzata sur Real Time PCR-amplifigaj instrumentoj de ABI, Stratagene kaj aliaj kompanioj, ĝi estas uzata por ĝustigi la diferencon inter PCR-tuboj kaj tuboj kaŭzitaj de PCR-dozaj eraroj.La koncentriĝo de 20× ROX Reference Dye bezonata por malsamaj instrumentoj estas malsama, kaj la uzanto povas aldoni ĝin laŭ la rekomendita koncentriĝo de la instrumento.

RNazo-Libera ddH₂O: RNase-libera steriligita ultra pura akvo por du-paŝaj RT-qPCR-reagoj.

Antaŭzorgoj:(Nepre legu la antaŭzorgojn atente antaŭ ol uzi la ilaron)

Atentu la operacian metodon de la eksperimento por eviti kruc-poluadon inter specimenoj.

Atentu la purecon de la eksperimenta medio kaj iloj por eviti RNase-poluadon kaj RNA-degeneron.

Prenu freŝajn aŭ bone konservitajn ĉelspecimenojn kaj neniam uzu ripetajn frostitajn ĉelspecimenojn.

5× Rekta qPCR-Miksaĵo, 2× Rekta qPCR-Miksaĵo-Taqman devus eviti ripetan frostig-degelon, alie ĝi influos inversan transskribon kaj PCR-efikecon.

Prepaporciojantaŭeoperacio

Nepre legu la instrukciojn atente antaŭ ol uzi ĉi tiun ilaron.La Cell Direct RT-qPCR Kit estas simpla, oportuna kaj rapida funkcii, kaj la instrukcioj provizas kompletajn informojn pri la tuta ilaro kaj kiel uzi ĝin ĝuste.Bonvolu prepari la necesajn eksperimentajn materialojn kaj ekipaĵojn antaŭ uzo.

Eksperimentaj materialoj kaj ekipaĵo

◆ Kulturĉeloj.

◆ 1.5 ml aŭ 2 ml, RNase-/DNase-Free centrifuga tubo, RNase-/DNase-Free pinto, 0.2 ml sterila qPCR-tubo.

◆ qPCR-maŝino, pipeto, surtabla centrifugilo (≥13.400×g) (depende de eksperimentaj bezonoj), ktp.

Sekureco

◆ Ĉi tiu produkto estas nur por scienca esploro, bonvolu ne uzi ĝin por farmaciaj, klinikaj, manĝaĵoj kaj kosmetikaj celoj.

◆ Kiam vi uzas kemiaĵojn, portu taŭgajn laboratoriajn vestaĵojn, gantojn, protektajn okulvitrojn, ktp.

Operaciogvidiloj

Ĉela Lizo-sistemoj, RT-sistemoj kaj qPCR-reagaj solvo-suplementaj pakoj povas esti aĉetitaj aparte, por detaloj en Apendico 1 (PAĜO 13).

Operacia gvidilo

A: Specimena RNA-liberigo

1.Ĉeloj estis antaŭtraktitaj: Lavu la ĉelkulturplaton per malvarma PBS, tiam lizi la ĉelojn (10-10).⁶), 10⁶ ol la kvanto de ĉeloj, estas rekomendita Foregene la Ĉelo kaj RNA-Izola Ilaro la Tuta (DE-03111) aŭ Besta Tuta RNA-Izola Ilaro (DE-03011) por RNA-ekstraktado kaj purigo.

1.1.Adheraj ĉeloj (24-puta plato kiel ekzemplo)

1.1.1.Determinu la nombron da ĉeloj en ĉiu puto, determinu ke la nombro da ĉeloj estas 1 × 10⁵, kaj uzu pipeton por forigi la kulturmedion el la kulturplado.

1.1.2.Aldonu 200 μl da antaŭmalvarmigita 1 × PBS al ĉiu puto.Ne pipetu plurfoje kaj forigu PBS el la putoj.Klinu la teleron kaj forigu kiel eble plej multe da PBS.Iru al paŝo 2.

1.1.3.Malsama ĉelkultura plado aŭ referenca nombrotabelo 1-1 en ĉelkultura plado estis aldonita antaŭmalvarmigita 1 × PBS por ĉela lavado.

Tablo 1-1: PBS-dozo por malsamaj nombroj da ĉeloj

Notu：Por certigi firman adherajn ĉelojn,granda nombro da ĉelperdo evitita dum lavado.

1.2.Pendaj ĉeloj aŭ adheraj ĉeloj kultivitaj en neporaj platoj

1.2.1.Adheraj ĉeloj kultivitaj en ne-multaj putaj teleroj (pendaj ĉeloj komenciĝas de la sekva paŝo 1.2.2), kolektas kaj apartigas la ĉelojn laŭ la normala ĉelkolekta metodo, kaj metu ilin en kulturplaton aŭ centrifugan tubon;se tripsinigo estas uzita, postulu centrifugadon por kolekti la ĉelojn kaj forigi restan tripsinon, aldonis PBS resuspenditajn ĉelojn en individuajn ĉelojn por disigi la ĉelojn.

1.2.2.Post la nombro da ĉeloj nombritaj, alikvotitaj ĉeloj 1×10⁵ unu por centrifugi tubojn, kolekti ĉelojn per centrifugado je 1000 × g dum 10 min.

1.2.3.Aldonu 200 μl PBS al la centrifugila tubo, ne pipetu plurfoje, kaj rekte aspiru la PBS.iri al paŝo 2. (Se malfacile precipitaĵo kaj la ĉeloj estis resuspendid denove, povas esti farita 1000×g centrifuged 10 min post forĵeti la supernatant, la ĉelo buleto daŭrigi al paŝo 2)

2.Ĉellizo: Forigu Buffer CL, ĝian temperaturon ekvilibrigitan al ĉambra temperaturo, DNA Eraser kaj Foregene Protease Plus II, laŭ la sekva tabelo 1-2 preta lizosistemo: (Lizosolvo estas preta por uzo).

Tablo 1-2: fendeto sistema preparo (Noto: en la preparado sur glacio)

3.( 24-puto telero kiel ekzemplo) Pipetu 200 μl de ĉela lizo majstra miksaĵo en ĉiun puton, Ripete blovu 5-10 fojojn, Kovu ĉe ĉambra temperaturo (20-25 ℃) dum 5 min.

Notu：Por eviti la formadon de vezikoj, bonvolu kiam pipeta skalo estis ĝustigita al 200μl aŭ malpli.La ĉeloj povas aperi nubaj post lizo, kio estas normala.

4.(24-puto telero kiel ekzemplo ) estas aldonita en la likva 20 μl Buffer ST (malsamaj lizaj sistemoj Buffer ST aldonita en kvanto montrita en Tabelo 1-3), ripetita pipetado 5-10 fojojn, ĉe ĉambra temperaturo (20-25 ℃ ) estis kovitaj dum 2 min .

Notu：La pipetpinto disponis sub la surfacon, certigante ke la lisato estis aldonita,por eviti la formadon de vezikoj, bonvolu kiam pipeta pipeta skalo estis ĝustigita al 200μl aŭ malpli.

Tabelo 1-3：Aldoni Buffer ST

5.La lisato estas uzata por postaj RT-qPCR-eksperimentoj.Se la postaj eksperimentoj ne povas esti faritaj ĝustatempe, bonvolu konservi ĝin sur glacio dum ne pli ol 2 horoj, kaj stoki je -20 ℃ aŭ -80 ℃ (ne pli ol tri monatoj).

B: RT-sistempreparo

1.Elprenu 5 × Rektan RT-Miksaĵon kaj metu ĝin sur glacibanon, lasu ĝin fandi nature, kaj milde miksu ĝin por posta uzo;elprenu RNase-Free ddH2O kaj fandu ĝin kaj metu ĝin sur glacibanon por posta uzo.Preparu la reagsistemon sur glacio laŭ Tabelo 2-1 sube.

Tabelo 2-1: Preparado de RT-reaga sistemo

2.After kompletigo de sistemo formuliĝo, milde miksita kaj centrifuged mallonge en la sekva tabelo 2 -2 reago kondiĉoj RT reago.

Tabelo 2-2: Agordo de la kondiĉo de RT-Reago

3.Post finiĝo de la reago, la reagoprodukto estis metita rekte sur glacion por qPCR , bonvolu meti la longdaŭran konservadon -20℃ aŭ -80 ℃ .

Noto: Pro la uzo de ne-purigita ŝablono, blankaj precipitaĵoj povas aperi en la inversa transskriba produkto.Ĉi tio estas normala fenomeno.Centrifugu la supernatante tuj por postaj eksperimentoj.

La rezulta RT-reaga solvo estas aldonita al la sekvaj Step Real Time PCR-reagaj sistemoj, oni rekomendas aldoni kvantojn de 10-30% de la reagsistemo.

C: qPCR-reaga sistemo-preparo

1.Taŭga kvanto de B preparita en paŝo cDNA-ŝablono laŭ la sekva tabelo 3-1 por prepari reagsistemon.

Noto: La kvanto de cDNA ŝablono respondecas pri 10-30% de la qPCR-sistemo.Ekzemple, en 20μl qPCR-sistemo, aldonu 2-6 μl da liza bufro, sed ne pli ol 6 μl.

2.La optimumigo bonaj qPCR-kondiĉoj (Annealing-temperaturo, ktp.) por qPCR-reago (La reagokondiĉoj donitaj ĉe Tabelo 3-2).

Noto: Provu uzi optimumigitajn kondiĉojn por qPCR-reagoj por akiri pli bonajn rezultojn.

Tabelo 3-1: Preparado de PCR-reaga sistemo

1*: Primer-koncentriĝo povas esti ĝustigita en la intervalo de 50-900 nM kiam amora reakcio estas malbona.

Noto: La qPCR-sistemo povas esti ĝustigita laŭ eksperimentaj bezonoj kaj fluoreskeca ciklormodelo.Por qPCR en 50μl sistemo, ĝustigu la reakcigan dozon proporcie laŭ la 20μl sistemo.

2*: Elektu la taŭgan finan koncentriĝon de ROX Reference Dye laŭ la fluoreskeca kvanta termika ciklo.La plej konvenaj ROX Reference Dye-koncentriĝoj por oftaj fluoreskecaj kvantaj cikliloj estas montritaj en la tabelo malsupre:

Tabelo 3-2: qPCR-reagaj kondiĉoj estas provizitaj

Noto: Por akiri la plej bonan qPCR-efikon, gradienta PCR povas esti uzata por optimumigi la reagkondiĉojn por malsamaj ŝablonoj kaj malsamaj enkondukoj.PCR-reagaj kondiĉoj varias depende de la fluoreskeca analizilo, ŝablono, enkonduko, ktp. En la specifa operacio, la optimumaj reakcikondiĉoj devas esti desegnitaj laŭ la specifaj kondiĉoj de la fluoreska kvanta termika ciklo, ŝablono tipo, grandeco de la interesa fragmento, bazsekvenco de la plifortigita fragmento kaj GC enhavo kaj longeco de enkondukoj, inkluzive de annealing temperaturo, reakcia tempo, ktp.

Real Time PCR-komencaj dezajnaj principoj

Antaŭen Enkonduko kaj Inversa Enkonduko

Por Real Time PCR, primer-dezajno estas tre grava.Enkondukoj estas rilatitaj al la specifeco kaj efikeco de PCR-plifortigo, kaj povas esti dizajnitaj rilate al la sekvaj principoj:

◆ Primer-longo: 18-30bp.

◆ GC enhavo: 40-60%.

◆ Tm-valoro: Primer-dezajna programaro, kiel Primer 5, povas doni la Tm-valoron de la enkonduko.La Tm-valoroj de la kontraŭfluaj kaj kontraŭfluaj enkondukoj devus esti kiel eble plej proksimaj.Oni ankaŭ povas uzi la kalkulformularon de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Dum elfarado de PCR, temperaturo sub la enkonduka Tm-valoro de 5 °C estas ĝenerale elektita kiel la kalcia temperaturo (la ekvivalenta pliiĝo en la kalcia temperaturo povas pliigi la specifecon de la PCR-reago).

◆ Primeroj kaj PCR-produktoj:

◆ Dezajno primer PCR plifortigo produkto longo estas prefere 100-150bp.

◆ Dezajnaj enkondukoj en la malĉefa struktura areo de la ŝablono devas esti evititaj kiel eble plej multe.

◆ Evitu la formadon de 2 aŭ pli komplementaj bazoj inter la 3′-finoj de kontraŭfluaj kaj laŭfluaj enkondukoj.

◆ Primer 3′ fina bazo ne povas ĉeesti kun 3 aldonaj sinsekvaj G aŭ C.

◆ La enkondukoj mem ne povas havi komplementajn strukturojn, alie formiĝos harpingla strukturo, influante PCR-ampligon.

◆ ATCG devas esti distribuita kiel eble plej egale en la komenca sekvenco, kaj la 3′ fina bazo devas esti evitita kiel T.

Apendico1：Cell RektaRT-qPCR Ilaro komponaĵot suplementa pako

1.Cell Lysis Solvo