La malalta proporcio de A260/A230 estas kutime kaŭzita de malpuraĵoj kun la maksimuma sorba ondolongo ĉe 230nm.Ni vidu, kion ĉi tiuj malpuraĵoj inkluzivas:

• Oftaj malpurigaĵoj	Sorba ondolongo	Proporcio-efiko
  Proteino	~230nm kaj 280nm	Samtempa redukto de A260/A 280kaj A260/A 280proporcioj
  Guanidina salo	220-240 nm	Redukti la A260/A 280rilatumo
  Fenolo	~270nm	-
  Trizol	~230nm kaj 270nm	Redukti la A260/A 280rilatumo
  EDTA	~230nm	Redukti la A260/A 280rilatumo
  Etanolo	230-240 nm	Redukti la A260/A 280rilatumo

 
 
 
Sorba ondolongo kaj kontrasta valoro de oftaj malpurigaĵoj

Proteina poluado
Proteinpoluo povas esti rigardita kiel la plej ofta poluo en la nukleaacida ekstraktadprocezo.Proteino ekzistas inter la supra akva fazo kaj la malsupraorganikafazo.Poluado reduktos la rilatumon de A260/A280 kaj A260/A230 samtempe, kaj la rilatumo de A260/A230 ŝanĝiĝos pli evidente ol la rilatumo de A260/A280.
Dum postainversa transskriboor qPCR-reagoj, proteinrestaĵoj povas malhelpi aŭ malhelpi enzimfunkcion.La plej bona maniero eviti proteinpoluadon estas memori la principon de "prefere malpli ol pli, malgranda kvanto multajn fojojn" kiam oni aspiras la supernatante.

2. Guanidinium-poluo
klorhidrato (GuHCl) kaj guanidina tiocianato (GTC) havas la efikon de malnaturado de proteinoj, kiuj povas rapide detrui ĉelmembranojn dum la nukleaacida ekstrakta procezo, kaŭzante proteinan denaturadon kaj precipitaĵon.La sorba ondolongo de GuHCl kaj GTC estas inter 220-240 nm, kaj laresta guanidinia salo reduktos la rilatumon de A260/A230.Kvankam la resta guanidinia salo reduktos la rilatumon,la efiko al kontraŭfluaj eksperimentoj estas fakte nekonsiderinda.

3. Trizol poluado
La ĉefa komponanto de Trizol estas fenolo.La ĉefa funkcio de fenolo estas lizi ĉelojn kaj liberigi proteinojn kaj nukleajn acidajn substancojn en ĉeloj.Kvankam fenolo povas efike denaturigi proteinojn, ĝi ne povas tute malhelpi RNase-agadon.Tial, 8-hidroksiquinolino, guanidinizotiocianato, β-mercaptoetanolo, ktp. estas aldonitaj al TRIzol por malhelpi endogenan kaj eksogenan RNazon.
Ekstraktante ĉelan RNA, Trizol povas rapide lizi la ĉelojn kaj malhelpi la nucleazon liberigitan de la ĉeloj, kaj la resta Trizol signife reduktos la rilatumon de A260/A230.
Pretiga metodo: Dum centrifugado, oni devas rimarki, ke la fenolo en Trizol estas facile solvebla en la akvofazo sub la kondiĉo de 4° kaj ĉambra temperaturo.

4. Etanola restaĵo
Etanolo estas uzita en la fina procezo por precipiti la DNA dum dissolvo de saljonoj kiuj povas esti ligitaj al la DNA.La sorba ondolongo de la plej altaabsorba pinto deetanolo estas ankaŭ ĉe 230-240 nm, kioankaŭ reduktos la rilatumon de A260/A230.
La metodo eviti etanolrestaĵon povas esti ripetita dufoje dum la fina eluo, blovante en lafumkapuĉodum du minutoj por permesi al la etanolo plene vaporiĝi antaŭ ol aldoni bufron por eluo.
Tamen, oni devas scii, ke la proporcio estas nur taksa indekso de RNA-kvalito.Se la supre menciitaj operacioj estas strikte reguligitaj, la devio inter la rilatumo kaj la norma gamo ne havos grandan efikon al kontraŭfluaj eksperimentoj.
Rilataj Produktoj:
Animal Total RNA-Izola ilaro
Plant Total RNA-Izola ilaro
Ĉela Totala RNA-Izola ilaro
Plant Total RNA-Izola ilaro Plus