Establi PCR-eksperimenton SOP por normigi la konduton de eksperimentpersonaro.
La eksperimentisto strikte observas la operaciajn procedurojn, kaj minimumigas la PCR-poluon kiu povas esti kaŭzita de homaj faktoroj aŭ malhelpas la okazon de poluo.Krome, la eksperimentanto devas havi la respondajn profesiajn sciojn kaj kapablojn, inkluzive de scipovo pri funkciado de rilataj ekipaĵoj, klarigado de la tuta laborprocezo, majstrado de la traktaj metodoj de poluado kaj laboratoriaj kvalitkontrolaj metodoj, kaj povi ĝuste interpreti la testrezultojn.
Establi norman PCR-laboratorion.
PCR-laboratorio estas dividita en kvar areojn principe, nome reakciila prepara areo, specimena pretiga areo, plifortiga areo kaj plifortiga produkta analiza areo.La unuaj du areoj estas antaŭ-plifortigaj areoj, kaj la lastaj du areoj estas post-plifortigaj areoj.La antaŭ-amplifiga zono kaj la post-amplifiga zono devas esti strikte apartigitaj.Eksperimentaj materialoj, reakciiloj, registra papero, plumoj, purigaj materialoj, ktp., povas nur flui de la antaŭ-amplifiga areo al la post-amplifiga areo, tio estas, de reakciaĵprepara areo → specimena pretiga areo → plifortiga areo → amplifiga produkta analiza areo, kaj ne devas flui malantaŭen .La aerfluo en la laboratorio ankaŭ devus flui de la antaŭ-amplifiga areo al la post-plifortiga areo, kaj ne flui malantaŭen.La ideala PCR-laboratorio-dezajno estas montrita malsupre:
Figuro A: Ideala PCR-laboratoria aranĝreĝimo kun negativa premo en la bufroĉambro
Figuro B: Ideala PCR-laboratoria aranĝreĝimo kun pozitiva premo en la bufroĉambro
La PCR-laboratoriaj aranĝodiagramoj donitaj en Figuro A kaj Figuro B devus esti pli ideala aranĝreĝimo, kaj la laboratorio kun kondiĉoj povas rilati al ĉi tiu reĝimo por dezajno.Por ordinaraj laboratorioj, oni rekomendas, ke la areo de PCR-amplifiko kaj la areo de analizo de la produkto povas esti apartigitaj, kaj la malfermo de la kovrilo devas esti reduktita kiel eble plej multe en la specimena prepara areo kaj la areo de PCR-amplificado.Memoru: Produktoj kaj eksperimentaj provizoj en la produkta analiza areo estas strikte malpermesitaj esti prenitaj al la specimena prepara areo kaj PCR-amplifiga areo.
Se la laboratorio nur faras PCR-detekton kaj identigon, estas rekomendite uzi fluoreskan kvantan PCR anstataŭe de konvencia PCR.
Fluoreskecaj kvantaj PCR-detektorezultoj povas esti kolektitaj kaj analizitaj per fluoreskecaj signaloj, do ne necesas malfermi la kovrilon por elektroforezo post la reago, kiu evitas la PCR-produktan poluadon kaŭzitan de la elfluo de reagproduktoj por formi aerosolojn.Se vi pliigas la nombron da kapmalfermaĵoj dum la ŝarĝa paŝo de ĝela elektroforezo, probable okazos aerosolpoluado.Oni rekomendas antaŭenigi la aplikon de kvanta PCR kaj iom post iom anstataŭigi kvalitan PCR.
La UNG kontraŭ-PCR-produkta poluadosistemo estas uzita por la PCR-reago.
La sistemo uzas dUTP anstataŭ dTTP.Post la PCR-reago, ĉiuj PCR-produktoj (DNA-fragmentoj) estas korpigitaj kun dUTP;en la sekva raŭndo de PCR-reago, la UNG-enzimo aldonita al la sistemo estas kovita je 37 °C dum 5 minutoj antaŭ PCR, kiu povas specife degradi ĉiujn DNA-fragmentojn enhavantajn dUTP, kaj tiam plenumi PCR-reagon.Ĉi tio povas tute forigi la aerosolan poluadon kaŭzitan de PCR-produktoj.La efiko estas montrita en la figuro sube:
Noto: Por la rekta PCR-serio, vi povas elekti la serioproduktojn de la kontraŭ-PCR-produkta poluado-sistemo de Foregene.Proponu
Por laboratorioj kiuj faras grandskalajn genotipajn testadojn, estas forte rekomendite uzi la UNG kontraŭ-PCR-produktan poluadon-sistemon por testado de reakciiloj aldone al la konstruado de raciaj laboratorioj.
Memorigilo: La uzo de ĉi tiu sistemo ne povas forigi la PCR-produktan poluadon, kiu jam estis kaŭzita.Sekve, la UNG-sistemo devas esti uzata komence de la koncerna testo, kaj la UNG-sistemo devas esti uzata por PCR-plifortigo, por malhelpi la poluadon de PCR-produktoj False pozitivaj.
Oni rekomendas uzi la Rektan PCR-UNG-sistemon de Foregene kiam oni faras grandskalajn provojn, kiel:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG;
Best Tissue Direct PCR Kit-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Ĉi tiu serio de ilaroj de Foregenepovas ne nur plenumi PCR-detekton rapide kaj grandskale, sed ankaŭ efike malhelpi kaj kontroli PCR-produktan poluadon.
Afiŝtempo: Mar-19-2021
