Aŭtoroj: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unuo: Jiaozhou Hospitalo, Dongfang Hospitalo Aligita al Tongji-Universitato

Nuntempe, la ĉefa specimena tipo por detekto de spira patogena nuklea acido estas gorĝa lampo.Estas multaj specoj de komune uzataj specimenaj konservadsolvoj, ĉiuj el kiuj devas esti fridigitaj aŭ frostigitaj por transportado kaj stokado;Estas malfacile kontroli la tutan procezon de malalta temperaturo dum la procezo de kolekto kaj transportado, kaj estas malfacile certigi la kvalitan kontrolon antaŭ specimena testado.^[1-2].

RNazo (RNazo) estas endonukleazo kiu hidrolizas RNA, plejparte interrompante fosfodiesterajn ligojn inter nukleotidoj.La RNase-molekulo estas tre stabila, estas disulfidaj ligoj en la strukturo, kaj ĝia agado ne postulas la ĉeeston de divalentaj katjonoj, do RNase ne estas facile denaturigita, kaj estas facile renatura eĉ post alta temperaturo aŭ la uzo de denaturantoj.RNazoj estas dividitaj en endogenajn kaj eksogenajn.La endogenaj RNasoj povas esti liberigitaj en la sama tempo kiam ĉeloj estas rompitaj.Tial, forigi la rolon de endogenaj RNases estas tre kritika paŝo en la RNA-ekstraktadprocezo.Eksogenaj RNazoj estas vaste distribuitaj.RNazoj ekzistas en la aero, homa haŭto, hararo kaj salivo, kiuj estas gravaj kialoj por la facila degenero de RNA.^[3].

Demando de datumoj

CANS-CL02-A009 "Apliko de Gvidlinioj pri Akredito de Medicina Kvalito kaj Kompetenteco en la Kampo de Molekula Diagnozo" en la teknikaj postuloj proponas, ke taŭgaj normoj pri akvokvalito estu formulitaj laŭ la aplikaĵo;Forĵeteblaj hermetikaj ujoj:

RNazo/Klasifiko

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A), derivita de bova pankreato, estas endoribonuclease kiu povas specife ataki la 3′ finon de pirimidinrestaĵoj sur RNA, tranĉante citozinon aŭ uracilon formitan per apudaj nukleotidoj.Fosfodiestera ligo, la fina produkto de la reago estas 3′ pirimidinnukleotido kaj oligonukleotido kun 3′ pirimidinnukleotido ĉe la fino.

(2) RNazo T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) estas derivita de Aspergillus orjzae, ĝi specife agas sur la 3′-fina fosfato de guanino, kaj la fendloko estas inter la 3′ fosfato de guanino kaj la 5′ hidroksilo de apudaj nukleotidoj.La fina produkto de la reago estas 3′guanilacido kaj oligonukleotidfragmentoj kun 3′guanilacido ĉe la fino.

(3) RNazo H

Ribonuclease H (RNase H) unue estis malkovrita de bovida timhisto, kaj ĝia ĉifra geno estis klonita en Escherichia coli.Ĝi povas specife degradi DNA: RNA-fadenoj en RNA hibridaj dupleksoj, rezultigante oligonukleotidojn kaj mononukleotidojn kun 3′-OH kaj 5′-monofosfataj finoj, ĝi ne povas degradi unu- aŭ duoble-fadenajn DNA aŭ RNA.

RNazo

Funkcio kaj uzo

Ribonukleazo povas katalizi la degeneron de ribonukleata acido (RNA) kaj povas esti sintezita artefarite.Medicina ungvento estas uzata topike por trakti traŭmaton kaj artikdoloron.Laŭ raportoj, ribonukleazo povas ŝanĝi la metabolon de la gastiga ĉelo, malhelpi virusan sintezon, malhelpi la proliferadon de gripa viruso en vitro kaj malhelpi la formadon de vakcinia kaj herpeta viruso en kokaj embrioj.Klinika uzo de ribonuclease ĉiutage intramuskola injekto de 180 mg, utila por la traktado de epidemia encefalito, ribonuclease povas katalizi la degradadon de ribonukleacido (RNA), kaj nun povas esti artefarite sintezita.Medicina ungvento estas uzata topike por trakti traŭmaton kaj artikdoloron.Laŭ raportoj, ribonukleazo povas ŝanĝi la metabolon de la gastiga ĉelo, malhelpi virusan sintezon, malhelpi la proliferadon de gripa viruso en vitro kaj malhelpi la formadon de vakcinia kaj herpeta viruso en kokaj embrioj.Klinika uzo de ribonuclease ĉiutage intramuskola injekto de 180 mg estas utila por la traktado de epidemia encefalito.

RNazo

Inhibidor Difino

Difino de RNase inhibitor-unuo: La kvanto de enzimo necesa por malhelpi 50% de la agado de 5ng RNase A estas unu unuo.

Kiel RNase Inhibitoroj Funkcias

Guanidinizotiocianato:

Guanidinizotiocianato estas organika komponaĵo kun la molekula formulo C2H6N4S.Ĉefe uzata en biologia medicino, kemiaj reakciiloj, ktp. Guanidine-isotiocianato estas proteina liza agento, kaj ĝi estas ofte uzata kiel la ĉefa komponanto de lizosolvo en molekulaj diagnozaj reakciiloj.Ĝi povas lizi histon, detrui ĉelstrukturon kaj disigi nuklean acidon de nukleoproteino, kaj havas fortan denaturiĝon al RNazo.Ĝi estas la plej efika RNase-inhibitoro nuntempe.

TRIzol estas nova totala RNA-eltira reakciilo kiu povas rekte eltiri totalan RNA de ĉeloj aŭ histoj.Ĝi enhavas substancojn kiel fenolo kaj guanidinizotiocianato, kiuj povas rapide interrompi ĉelojn kaj malhelpi nucleazoj liberigitaj de ĉeloj.

(Tamen, la guanidin-izotiocianato estas danĝera por la sano de laboratoriaj esploristoj.)

RNasin:

Acida glikoproteino ĉerpita el rata hepato aŭ homa blastodermo.Rnasin estas ne-konkurenciva inhibitoro de RNazo, kiu povas ligi al diversaj RNazoj por malaktivigi ilin.

(Pliaj detaloj: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Halta temperaturo:

Alta temperaturo ankaŭ estas ofta rimedo de proteinmalnaturado.

Dietilpirokarbonato (DEPC):

DEPC estas forta sed nekompleta RNase-inhibitoro, kiu povas malhelpi RNase-agadon per kombinado kun la aminoacida imidazolringo de la RNase aktiva grupo por denaturigi proteinojn.

Vanadila ribonukleozida komplekso:

Komplekso formita de vanadiooksidaj jonoj kaj nukleozidoj, kiu ligas al RNazo en formo de transiraj substancoj, kiuj preskaŭ povas tute malhelpi la agadon de RNazo.

alia:

SDS, ureo, diatomea tero, ktp ankaŭ havas certan inhibician efikon sur RNazo.

Fakaj Recenzoj

Li Yujie Ĉefa Teknikisto

Direktoro de Laboratorio-Sekcio, Jiaozhou Hospitalo, Dongfang Hospital Filiigita al Tongji University

Por malhelpi la biodegradiĝon de eksogena RNazo, maskoj, gantoj kaj ĉapeloj devus esti portitaj kaj anstataŭigitaj ofte dum la RNA-eltiradprocezo.Ĉiuj vitroj devas esti bakitaj en sekiga forno je 200 °C dum pli ol 2 horoj.Materialoj uzataj por bakado, kiel plasto, devas esti traktitaj per DEPC-akvo, kaj poste lavitaj per distilita akvo.La reakciiloj aŭ aparatoj uzitaj por eltiro, konservado kaj identigo de RNA devus esti dediĉitaj al RNA, kaj sendependa RNA-operaciareo devus esti starigita.

referencoj:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakterioj kaj virusoj en la nazofaringo tuj antaŭ komenco de akutaj malsupraj spiraj infektoj en indiĝenaj aŭstraliaj infanoj [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Hospitala Infektkontrolo-Branĉo de Ĉina Preventa Medicino-Unuiĝo.Gvidlinioj por la kolekto kaj inspektado de klinikaj mikrobaj specimenoj [J].Ĉina Revuo pri Hospitala Infekto, 2018(20):3192-3200.

[3] "Klinika Test Ten Thousand Why Molecular Biology Test Volume"