Gvidilo pri Problema Analizo

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Malalta rendimento aŭ neniu DNA

Estas kutime multaj faktoroj kiuj influas la rendimenton de genoma DNA, inkluzive de la fonto de la provaĵo, la aĝo de la provaĵo, la konservadkondiĉoj de la provaĵo, kaj la operacio.

Genomic DNA ne povus esti akirita dum ekstraktado

1. La histoprovaĵoj estas nedece stokitaj aŭ stokitaj tro longe, rezultigante la degeneron de la genoma DNA.

Rekomendo: Konservu histospecimenojn en likva nitrogeno aŭ -20°C;provu uzi lastatempe kolektitajn specimenojn por eltiro de genoma DNA.

2. Tro malgranda specimena kvanto povas kaŭzi ke la responda genoma DNA ne estu eltirita.

Sugesto: Por histoprovaĵoj kiuj estis konservitaj dum longa tempo aŭ havas severan genoman DNA-degeneron, la kvanto de histoprovaĵoj povas esti taŭge pliigita por eltiri konsiderindan genoman DNA.La kvanto de la specimeno povas esti determinita laŭ la DNA-bezonoj, sed la freŝa specimeno ne devas superi 100mg, kaj la seka specimeno ne superu 30mg.

3. La specimeno ne estas muelita kun likva nitrogeno aŭ metita tro longe post likva nitrogeno.

Sugesto: Dum DNA-eltiro, la specimeno devas esti plene muelita kun likva nitrogeno por rompi la ĉelan muron;post muelado, bonvolu transdoni la specimenan pulvoron al PL1 antaŭvarmigita je 65°C kiel eble plej baldaŭ (post kiam la grunda pulvoro estas fandita, la genoma DNA komencos degradi rapide).

4. Nedeca konservado de Foregene Protease rezultigas reduktitan aŭ senaktivigitan agadon.

Rekomendo: Konfirmu la konservajn kondiĉojn de Foregene Protease aŭ anstataŭigu ĝin per nova Foregene Protease por enzima hidrolizo.

5. La ilaro estas nedece stokita aŭ stokita tro longe, kaŭzante iujn komponantojn en la ilaro malsukcesi.

Rekomendo: Aĉetu novan plantan genoman DNA-ekstraktan ilaron por rilataj operacioj.

6. Nedeca uzo de la ilaro.

Sugesto: Aĉetu Plant DNA-Izolan Ilaron dediĉitan al specimenoj por eltiro kaj purigado de planta genoma DNA.

7. Buffer WB sen aldoni anehidra etanolo.

Rekomendo: Certigu aldoni la ĝustan volumon de absoluta etanolo al Buffer WB.

8. La eluvaĵo ne estis guteta sur la silika membrano ĝuste.

Sugesto: Aldonu la antaŭvarmigitan eluilon ĉe 65℃gute al la mezo de la silika ĝela membrano, kaj lasu ĝin ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por pliigi la eluian efikecon.

Ekstraktado por akiri malalt-rendimentan genoman DNA

1. La specimeno estas nedece stokita aŭ konservita tro longe, rezultigante la degeneron de genoma DNA.

Rekomendo: Konservu histospecimenojn ĉe -20℃;provu uzi lastatempe kolektitajn histoprovaĵojn por genoma DNA-eltiro.

2. Se la kvanto de histoprovaĵoj estas tro malgranda, la ĉerpita genoma DNA estos malpli.

Sugesto: Kelkaj plantspecimenoj estas riĉaj je akvo, kiel akvaj plantoj kiel algoj ktp., la dozo povas esti taŭge pliigita aŭ la akvo povas esti malhidratigita iom antaŭ la operacio.

3. La specimenoj ne estis plene muelitaj kun likva nitrogeno aŭ estis lasitaj ĉe ĉambra temperaturo tro longe post muelado.

Sugesto: La likva nitrogeno muelanta devas esti sufiĉa, kaj la specimena ĉela muro devas esti rompita kiel eble plej multe;tuj post la muelado, la specimena pulvoro devas esti translokigita al 65℃antaŭvarmigita Buffer PL1 por la sekva paŝo.

4. Ne uzante la ĝustan ilaron.

Rekomendo: Uzu dediĉitan Plant DNA-Izolan Ilaron por ĉerpi kaj purigi plantan genoman DNA.

5. Nedeca konservado de Foregene Protease rezultigas reduktitan aŭ senaktivigitan agadon.

Rekomendo: Konfirmu la konservajn kondiĉojn de Foregene Protease aŭ anstataŭigu ĝin per nova Foregene Protease por enzima hidrolizo.

6. Eluentproblemo

Rekomendo: Bonvolu uzi Buffer EB por eluo;se vi uzas ddH₂O aŭ aliaj eluvaĵoj, certigu, ke la pH de la eluvaĵo estas inter 7.0-8.5.

7. La eluvaĵo ne estas gutita ĝuste

Sugesto: Bonvolu aldoni la elivan guton al la mezo de la silika membrano kaj lasi ĝin ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por pliigi la eluigan efikecon.

8. La elflua volumo estas tro malgranda

Sugesto: Bonvolu uzi la elivon por genoma DNA-eluo laŭ la instrukcioj, almenaŭ ne malpli ol 100.μl.

Ekstraktita genoma DNA kun malalta pureco

La malalta pureco de genoma DNA kondukos al la fiasko aŭ malbona efiko de kontraŭfluaj eksperimentoj, kiel ekzemple: la enzimo ne povas esti tranĉita, kaj la celgenfragmento ne povas esti akirita per PCR.

1. Diversa proteina poluado, RNA-poluado.

Analizo: Buffer PW ne estis uzata por lavi la kolonon;Buffer PW ne kutimis lavi la kolonon ĉe la ĝusta centrifuga rapideco.

Sugesto: provu certigi, ke ne estas precipitaĵo en la supernatante, kiam la supernatante trapasas la kolonon;nepre lavi la purigan kolumnon kun Buffer PW laŭ la instrukcioj, kaj ĉi tiu paŝo ne povas esti preterlasita.

2. Malpura jona poluado.

Analizo: La Buffer WB-lavkolono estis preterlasita aŭ nur lavita unufoje, rezultigante restan jonan poluadon.

Rekomendo: Nepre lavi dufoje kun Buffer WB laŭ la instrukcioj por forigi restajn jonojn kiel eble plej multe.

3. RNase-poluado.

Analizo: Eksogena RNazo estas aldonita al la Bufro;malĝusta lava operacio en Buffer PW rezultigos restan RNazon kaj influos kontraŭfluajn RNA-eksperimentajn operaciojn, kiel ekzemple en vitra transskribo.

Sugesto: Foregene-serio-nukleacidaj eltiraj ilaroj povas forigi RNA sen plia RNazo, kaj ĉiuj reakciiloj en Plant DNA-Izola Ilaro ne bezonas RNazon;nepre lavi la purigan kolumnon kun Buffer PW laŭ la instrukcioj, kaj ĉi tiu paŝo ne povas esti preterlasita.

4. Etanolaj restaĵoj.

Analizo: Post lavi la purigan kolumnon per Buffer WB, neniu malplena tubo centrifugado estis farita.

Rekomendo: Sekvu la instrukciojn por taŭga malplena tubo centrifugado.

Instrukcia Manlibro:

Instrukcia Manlibro pri Plant DNA-Izoligo