PCR-maŝino|Ĉu vi vere komprenas?
Nobel-premiita PCR-teknologio
En 1993, amerika sciencisto Mulis ricevis la Nobelpremion pri Kemio, kaj lia atingo estis la invento de PCR-teknologio.La magio de PCR-teknologio estas en la sekvaj karakterizaĵoj: Unue, la kvanto de DNA por esti amplifita estas ekstreme malgranda, kaj teorie unu molekulo povas esti uzata por plifortigo;due, la plifortiga efikeco estas alta, kaj la kvanto de la celgeno estas eksponenta.Plifortigo, pli ol 10 milionoj da fojoj en kelkaj horoj.Nun la PCR-instrumento estis vaste uzata en vivscienca esplorado kaj multaj aliaj aspektoj.
Malsamaj modeloj kaj produktantoj de termocikliloj povas elmontri malsaman efikecon kaj ripeteblon.Tiuj diferencoj influas ne nur PCR-efikecon sed ankaŭ la precizecon kaj konsistencon de datumoj akiritaj.Kompreni PCR-maŝinajn funkciojn povas helpi nin maksimumigi la sukceson de niaj eksperimentoj.
Modulo de hejtado
La precizeco de la temperaturo de la termika ciklo povas esti decida por la sukceso aŭ fiasko de PCR.Bone-al-bona temperaturkonsistenco sur la hejta bloko ankaŭ estas kritika por akiri fidindajn kaj reprodukteblajn PCR-rezultojn.
Unu maniero por certigi termikan precizecon estas testi ofte uzante temperaturajn konfirmkompletojn kaj rekalibri laŭbezone de trejnita profesiulo.Temperaraj konfirmtestoj estas kutime uzataj por:
Bone-al-puta precizeco relative al fiksita temperaturo en izoterma reĝimo
Bone-al-puta precizeco relative al fiksita temperaturo post temperaturkonverto
Varmega Klapo Temperaturo Precizeco
Primera Kuracia Temperatura Kontrolo
Gradienta temperaturkontrolo estas funkcio de la PCR-instrumento kiu faciligas la optimumigon de enkonduka kalciado en PCR.La celo de la gradienta agordo estas atingi diversajn temperaturojn inter moduloj, kaj je ≥2°C temperaturo plialtiĝo kaj falo inter ĉiu kolumno, malsamaj temperaturoj povas esti provitaj samtempe por akiri la optimuman amoran kalson-temperaturon.Teorie, vera gradiento atingas linian temperaturon inter moduloj.
Tamen, konvenciaj gradienttermocikliloj tipe utiligas ununuran termikan blokon kaj kontrolas temperaturon tra du hejtado kaj malvarmiganta elementoj situantaj ĉe ambaŭ finoj, ofte rezultigante la sekvajn limigojn:
Oni povas agordi nur du temperaturojn: la altaj kaj malaltaj temperaturoj por amora kalciado estas fiksitaj ĉe ambaŭ finoj de la termika modulo, kaj preciza fikso de aliaj temperaturoj ne povas esti atingita inter moduloj.
Pro la varmointerŝanĝo inter la malsamaj kolonoj, la temperaturo inter malsamaj regionoj sur la modulo pli sekvas supozeble sigmoidal kurbo prefere ol vera lineara gradiento.
Specimena temperaturo
La kapablo de la termika ciklo kontroli la specimenan temperaturon estas tre grava por la precizeco de la PCR-rezultoj.Instrument-specifaj parametroj kiel deklivkurzoj, tenadotempoj kaj algoritmoj estas kritikaj por antaŭdiro de specimena temperaturo.
La indico de hejtado kaj malvarmigo de la PCR-maŝino signifas, ke la temperaturo ŝanĝiĝas inter PCR-ŝtupoj kiuj okazas dum certa tempodaŭro.Ĉar necesas certa tempo por la varmo translokiĝi de la modulo al la provaĵo, la fakta hejtado kaj malvarmigo de la provaĵo estos pli malrapida.Tial, la difino de temperaturŝanĝrapideco devas esti distingita kaj komprenita.
La maksimuma aŭ pinta modula deklivirejo reprezentas la plej rapidan temperaturŝanĝon kiun la modulo povas atingi dum tre malgranda tempodaŭro dum la deklivirejo.
La averaĝa blok-deklivrapideco reprezentas la indicon de temperaturŝanĝo dum pli longa tempodaŭro kaj provizos pli reprezentan kvanton de PCR-maŝino-rapideco.
La maksimuma specimena hejtado kaj malvarmigo kaj la averaĝa specimena hejtado kaj malvarmigo spegulas la realan temperaturon akiritan de la specimeno.La indico de specimena hejtado kaj malvarmigo provizos pli precizan komparon de la agado de la PCR-maŝino kaj ĝia ebla efiko al PCR-rezultoj.
Kiam vi faras anstataŭigon de ciklilo, oni rekomendas uzi instrumenton kun deklivrapida programo, kiu simulas la antaŭan reĝimon por pli facila anstataŭigo kaj minimuma efiko al PCR-ripeteblo.
La termociklilo devas esti desegnita al tempopaŝoj nur post kiam la provaĵo atingas la fiksitan temperaturon.Tiamaniere, la tempo, kiam la specimeno estas konservita ĉe la fiksita temperaturo, estos pli precize konservita kun la respondaj ciklokondiĉoj postulataj en la operacia proceduro.
Termocikliloj ofte uzas kompleksajn matematikajn algoritmojn por certigi ke specimenoj povas rapide atingi fiksitan temperaturon laŭ antaŭfiksita programo.Surbaze de la volumo de la reagsistemo kaj la dikeco de la PCR-plastoj uzataj, la algoritmo povas antaŭdiri la temperaturon de la specimeno kaj la tempon, kiun ĝi bezonos por atingi la fiksitan temperaturon.Fidante je ĉi tiuj algoritmoj, dum la hejtado aŭ malvarmiga procezo de la termociklilo, la bloktemperaturo kutime superos la fiksitan valoron tra procezo nomita termika bloko superpaso aŭ subŝovo.Tia aranĝo certigas, ke la specimeno atingas la fiksitan temperaturon kiel eble plej rapide sen superpafi aŭ malsuperi sin.
Eksperimenta trairo
Faktoroj kiuj povas pliigi la trairon de termika ciklilo inkluzivas deklivirajn tarifojn, termoblokajn agordojn kaj integriĝon de aŭtomatigaj platformoj.
La hejtado kaj malvarmigo de la termociklilo reprezentas la rapidecon je kiu ĝi atingas la fiksitan temperaturon.Ju pli rapide la temperaturo altiĝas kaj malaltiĝos, des pli rapide la PCR funkcios, kio signifas, ke pli da eksperimentoj povas esti kompletigitaj en difinita tempodaŭro.Krome, eksperimentoj povas esti akcelitaj uzante pli rapidajn DNA-polimerazojn.
La dezajno de la termika ciklomodulo ankaŭ estas decida por PCR-eksperimentoj.Ekzemple, anstataŭigeblaj moduloj permesas flekseblecon en la nombro da provaĵoj per kuro.Krome, varmigaj moduloj kun individue kontroleblaj moduloj estas idealaj por funkcii malsamajn PCR-programojn samtempe sur unu termika ciklo.
Por aŭtomatigita alt-trafia PCR, la programaro, kiu kontrolas la pipet-traktadsistemon, devus esti programebla kaj kongrua.Aŭtomatigitaj sistemoj estas idealaj por elfarado de alt-produktitaj PCR-reagoj ĉar ili povas esti kuritaj ade kun nur malmulte da homa interveno, tiel minimumigante la tempon postulatan por mana eksperimenta aranĝo kaj pliigante la nombron da reagoj en antaŭfiksita tempoperiodo.
Fidindeco, Fortikeco kaj Kvalito-Asekuro de Termikaj Cikliloj
Krom agado kaj trairaj kapabloj, la PCR-maŝino ankaŭ devus povi elteni certan ripetan uzon, median streson kaj sendajn kondiĉojn.Kelkaj produktantoj povas raporti pri kiel la instrumento elfaras fidindecon kaj fortikectestojn.La ekvivalenta PCR-instrumenta detekto inkluzivas:
Fidindeco: Mekanikaj platformoj estas uzataj por fari ripetajn testojn sur ofte uzataj instrumentaj komponantoj kiel termikaj kovriloj, kontrolpaneloj/tuŝekranoj kaj temperaturbiciklaj moduloj.
Ĉirkaŭa premo: Mediaj ĉambroj povas esti uzataj por simuli malsamajn kondiĉojn de rutinaj eksperimentoj, kiel temperaturo, humido.
Ekspedado: Intensa ŝoko kaj vibrado-testado povas esti farita laŭ la normoj de Internacia Sekureca Asocio por certigi, ke la instrumento povas alveni en nedifektitaj funkciaj kondiĉoj.
Garantio kaj servo por prizorgado de la PCR-maŝino
Malgraŭ rigora fidindeco kaj fortikectestado, termocikliloj neeviteble havas teknikajn problemojn dum la vivo de la instrumento.Por trankvilo, la garantio, servo kaj prizorgado de la fabrikanto devus esti pripensitaj kiam vi aĉetas instrumenton.
La fleksebleco de servoj kiel surloka/revena al fabriko prizorgado, malproksimaj monitoraj servoj kaj anstataŭigaj instrumentoj en la prizorgado-procezo ktp., por redukti la efikon al laborefikeco.
La daŭro de la garantia periodo, la tempodaŭro de la servo, la alirebleco de teknika subteno kaj la kapabloj de profesia helppersonaro.
Farebleco de instrumentinstalado, funkciado, kunlaboro kaj konfirmo por plenumi laboratoriojn kaj rilatajn reguligajn postulojn.Servoj pri bontenado kiel temperaturkonfirmo, testado kaj kalibrado estas disponeblaj por certigi, ke la instrumento funkcias ĝuste kun la respondaj parametroj.
Rilataj Produktoj:
Afiŝtempo: Oct-18-2022
