• facebook
  • linkedin
  • youtube

Pluraj revoluciaj inventoj en la historio de detektteknologio en mia menso estas imunomarkada teknologio bazita sur la principo de antigen-antikorpa specifa ligado, PCR-teknologio kaj sekvenca teknologio.Hodiaŭ ni parolos pri PCR-teknologio.Laŭ la evoluo de PCR-teknologio, homoj kutime dividas PCR-teknologion en tri generaciojn: ordinara PCR-teknologio, realtempa fluoreska kvanta PCR-teknologio kaj cifereca PCR-teknologio.

Ckomuna PCR-tekniko

w1

KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)

Kary Mullis inventis la polimerazan ĉenreakcion (polimeraza ĉenreakcio, PCR) en 1983. Onidire, kiam li veturis sian amatinon, li subite havis fulmon de inspiro kaj pensis pri la principo de PCR (pri la avantaĝoj de veturado).Al Kary Mullis estis premiita la Nobelpremio pri Kemio en 1993. The New York Times komentis: "Tre originala kaj signifa, preskaŭ dividante biologion en antaŭ-PCR kaj post-PCR-epokojn.

La principo de PCR: Sub la katalizo de DNA-polimerazo, la patrina fadeno DNA estas utiligita kiel la ŝablono, kaj la specifa enkonduko estas utiligita kiel la deirpunkto de etendaĵo, kaj la filinfadeno DNA komplementa al la patrina fadenoŝablono DNA estas kopiita enen. vitro per denaturado, kalciado, etendo kaj aliaj paŝoj.Ĝi estas DNA-sinteza plifortiga teknologio en vitro, kiu povas rapide kaj specife plifortigi ajnan celan DNA en vitro.

w2

Avantaĝoj de ordinara PCR
1.Klasika metodo, kompletaj internaciaj kaj hejmaj normoj
2.Pli malalta kosto de instrumentaj reakciiloj
3.PCR-produktoj povas esti reakiritaj por aliaj molekula biologiaj eksperimentoj
Rekomendita Foregene PCR-maŝino: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Rilataj produktoj: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Malavantaĝoj de ordinara PCR
1.facile poluebla
2.maloportuna operacio
3.nur kvalita analizo
4.Modera sentemo
5.Estas nespecifa plifortigo, kaj kiam la nespecifa bendo estas la sama grandeco kiel la celgrupo, ĝi ne povas esti distingita
 
Capilara elektroforez-bazita PCR
En respondo al la mankoj de ordinara PCR, kelkaj produktantoj enkondukis instrumentojn bazitajn sur la principo de kapilara elektroforezo.La elektroforezpaŝo post PCR-plifortigo estas kompletigita en la kapilaro.La sentemo estas pli alta, kaj la diferenco de pluraj bazoj povas esti distingita kaj la plifortigo povas esti kalkulita de MAERKER.produkta enhavo.La malavantaĝo estas, ke la PCR-produkto ankoraŭ devas esti malfermita kaj metita en la instrumenton, kaj ankoraŭ ekzistas granda risko de poluado.

w3

CapilaroEelektroforezo

 

2. Realtempa fluoreska kvanta PCR (Kvanta Realtempa PCR, qPCR) teknologioFluoreska kvanta PCR, ankaŭ nomita Real-Time PCR, estas nova nuklea acida kvanta teknologio evoluigita fare de PE (Perkin Elmer) en 1995. La evoluhistorio de fluoreska kvanta PCR estas historio de animaj luktoj de gigantoj kiel ABI, Roche. , kaj Bio-Rad.Se vi interesiĝas, vi povas kontroli ĝin.Ĉi tiu tekniko estas nuntempe la plej matura kaj vaste uzata duonkvanta PCR-tekniko.

Rekomendita qPCR-Maŝino: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/

Fluoreska tinkturfarba metodo (SYBR Green I):SYBR Green I estas la plej ofte uzita DNA-liga tinkturfarbo por kvanta PCR, kiu ligas nespecife al duoble-fadena DNA.En la libera ŝtato, SYBR Green elsendas malfortan fluoreskecon, sed unufoje ligita al duoble-fadena DNA, ĝia fluoreskeco pliiĝas 1000-oble.Tial, la totala fluoreska signalo elsendita per reago estas proporcia al la kvanto de duoble-fadena DNA ĉeestanta kaj pliiĝos kun la pliiĝo de plifortigita produkto.Ĉar la tinkturfarbo ligas nespecife al duoble-fadena DNA, falsaj pozitivaj rezultoj povas esti generitaj.

Rilataj produktoj: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/

Fluoreska sondimetodo (Taqman-teknologio): DumPCR-plifortigo, specifa fluoreska enketo estas aldonita samtempe kiel paro de enkondukoj.La enketo estas lineara oligonukleotido, kun fluoreska raportistogrupo kaj fluoreska estingilgrupo respektive etikedita ĉe ambaŭ finoj.Kiam la sondilo estas nerompita, la fluoreska signalo elsendita de la raportisto-grupo estas sorbita de la estingila grupo, kaj la detekto Ne estas fluoreska signalo;dum PCR-plifortigo (en la etendostadio), la 5'-3' Dicer-agado de Taq-enzimo digestos kaj degradis la enketon, tiel ke la raportisto-fluoreska grupo kaj la estingila fluoreska grupo estas apartigitaj, tiel ke la fluoreska monitora sistemo La fluoreska grupo. signalo povas esti ricevita, tio estas, ĉiufoje kiam DNA-ĉeno estas plifortigita, fluoreska molekulo formiĝas, kiu realigas la kompletan sinkronigon de la amasiĝo de fluoreskaj signaloj kaj la formado de PCR-produktoj.Taqman-enketmetodo estas la plej ofte uzita detektometodo en klinika detekto.

Rilataj produktoj: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/

w4

Avantaĝoj de qPCR
1.La metodo estas matura kaj la subtenaj ekipaĵoj kaj reakciiloj estas kompletaj
2.Meza kosto de reakciiloj
3.facile uzebla
4.Alta detekta sentemo kaj specifeco
 
Malavantaĝoj de qPCR

La mutacio de la celgeno kondukas al maltrafita detekto.
La detektrezulto de malalta koncentrita ŝablono ne povas esti determinita.
Estas granda eraro kiam oni uzas la norman kurbon por kvanta detekto.
 
3. Cifereca PCR (cifereca PCR, dPCR) teknologio
Cifereca PCR estas tekniko por la absoluta kvantigo de nukleaj acidaj molekuloj.Kompare kun qPCR, cifereca PCR povas rekte legi la nombron da DNA/RNA-molekuloj, kio estas la absoluta kvantigo de nukleaacidaj molekuloj en la komenca provaĵo.En 1999, Bert Vogelstein kaj Kenneth W. Kin-zler formale proponis la koncepton de dPCR.
 
En 2006, Fluidigm estis la unua se temas pri produkti komercan pecet-bazitan dPCR-instrumenton.En 2009, Life Technologies lanĉis la OpenArray kaj QuantStudio 12K Flex dPCR-sistemojn.En 2013, Life Technologies lanĉis la QuantStudio 3DdPCR-sistemon, kiu uzas alt-densecan nanoskalan mikrofluidan pecetteknologion por egale distribui provaĵojn al 20,000 individuaj ĉeloj.en la reago bone.

w5

En 2011, Bio-Rad lanĉis la gutet-bazitan QX100 dPCR-instrumenton, kiu uzas akvo-en-oleoteknologion por egale distribui la provaĵon al 20,000 guteto-akvo-en-oleo, kaj uzas guteto-analizilon por analizi la gutetojn.En 2012, RainDance lanĉis la RainDrop dPCR-instrumenton, movitan per altprema gaso, por dividi ĉiun norman reagsistemon en reakcian emulsion enhavantan 1 milionon ĝis 10 milionojn da pikolit-nivelaj mikrogutetoj.

w6

Ĝis nun, cifereca PCR formis du ĉefajn frakciojn, pecetspecon kaj gutetospecon.Ne gravas kia cifereca PCR, ĝiaj kernaj principoj limigas diluon, finpunkton PCR kaj Poisson-distribuon.La norma PCR-reaga sistemo enhavanta nukleacidajn ŝablonojn estas egale dividita en dekojn da miloj da PCR-reagoj, kiuj estas distribuitaj al blatoj aŭ mikrogutetoj, tiel ke ĉiu reago enhavas kiel eble plej multe ŝablonmolekulon, kaj unu-molekula ŝablono PCR-reago estas farita.Legante la fluoreskecon La ĉeesto aŭ foresto de la signalo estas nombrita, kaj la absoluta kvantigo estas farita post alĝustigo de la statistika distribuo de Poisson.

La jenaj estas la karakterizaĵoj de pluraj ciferecaj PCR-platformoj, kiujn mi uzis:

1. Bio-Rad QX200 guto cifereca PCR Bio-RadQX200 estas tre klasika cifereca PCR-platformo, la baza detekta procezo: 20 000 specimenoj estas generitaj per la generatoro de gutetoj Akvo-en-oleo mikro-gutetoj estas plifortigitaj sur ordinara PCR-maŝino, kaj finfine la fluoreskeca signalo de ĉiu mikro-guto estas legata. de mikro-gutetoleganto.La operacio estas pli komplika, kaj la risko de poluado estas meza.

w7

Xinyi TD1 mikro-guteto cifereca PCRXinyi TD1 estas hejma cifereca PCR-platformo, la baza detektoprocezo: generi 30,000-50,000 akvo-en-oleo-gutetojn tra gutogeneratoro, amplifi sur komuna PCR-instrumento, kaj finfine pasi La gutetoleganto legas la fluoreskan signalon de ĉiu guto.Kaj gutetogenerado kaj legado en ĉi tiu platformo estas faritaj en dediĉita blato kun malalta risko de poluado.

w8

 STILLA Naica mikro-gutita blato cifereca PCRSTILLA Naica estas relative nova cifereca PCR-platformo.La baza detektoprocezo estas: aldonu la reaktan solvon al la blato, enmetu la blaton en la mikro-gutitan generacion kaj plifortigan sistemon, kaj generu 30 000 mikro-gutojn.Disvastiĝi sur la blato, kaj PCR-amplitigo estas kompletigita sur la blato.Tiam la amplifita blato estas transdonita al la mikro-guteta legad-analizsistemo, kaj la fluoreska signalo estas legata per fotado.Ĉar la tuta procezo okazas en fermita blato, la risko de poluado estas malalta.

w9

4. ThermoFisher QuantStudio 3D blato cifereca PCR

ThermoFisher QuantStudio 3D estas alia klasika cifereca PCR-platformo bazita sur peceto.Ĝia baza detekta procezo estas: aldonu la reakcian solvon en la disvastigilon, kaj disvastigu la reakcian solvon egale sur la blato kun 20,000 mikroputoj tra la disvastilo., metu la blaton sur la PCR-maŝinon por plifortigi, kaj fine metu la blaton en la leganton kaj prenu foton por legi la fluoreskan signalon.La operacio estas relative komplika, kaj la tuta procezo estas farita en fermita blato, kaj la risko de poluado estas malalta.

w10

5. JN MEDSYS Clarity-blato cifereca PCR

JN MEDSYS Clarity estas relative nova peceta cifereca PCR-platformo.Ĝia baza detekta procezo estas: aldonu la reakcian solvon en la aplikilon, kaj disvastigu la reakcian solvon egale sur 10,000 PCR-tuboj fiksitaj en la PCR-tubo tra la aplikilo.Sur la mikroporan peceton, la reagsolvo eniras la peceton per kapilara ago, kaj la PCR-tubo kun la blato estas metita sur la PCR-maŝinon por plifortigo, kaj finfine la peceto estas metita en la leganton por legi la fluoreskan signalon prenante foton.La operacio estas pli komplika.La risko de poluado estas malalta.

w11

La parametroj de ĉiu cifereca PCR-platformo estas resumitaj jene:

w12

La taksaj indikiloj de la cifereca PCR-platformo estas: la nombro da dividitaj unuoj, la nombro da fluoreskaj kanaloj, la komplekseco de operacio kaj la risko de poluado.Sed la plej grava afero estas la detekta precizeco.Unu maniero taksi ciferecajn PCR-platformojn estas uzi plurajn ciferecajn PCR-platformojn por kontroli unu la alian, kaj alia maniero estas uzi normajn substancojn kun precizaj valoroj.

Avantaĝoj de dPCR
1.Atingo de absoluta kvantigo
2.Pli alta sentemo kaj specifeco
3.Povas detekti malaltajn kopiajn specimenojn
Malavantaĝoj de dPCR1. Multkostaj ekipaĵoj kaj reakciiloj 2. Komplika operacio kaj longa tempo de detekto 3. Mallarĝa detekta gamo

Nuntempe, la tri generacioj de PCR-teknologio havas siajn proprajn avantaĝojn kaj malavantaĝojn, kaj ĉiu havas siajn proprajn aplikajn kampojn, kaj ne estas rilato, ke unu generacio anstataŭas la alian.La kontinua progreso de teknologio injektis novan viglecon en PCR-teknologion, ebligante ĝin malŝlosi unu aplikan direkton post alia, igante nuklean acidan detekto pli oportuna kaj preciza.
Fonto: D-ro Yuan prenas vin por testado
 
Rekomenditaj Produktoj:


Afiŝtempo: Nov-18-2022