• facebook
  • linkedin
  • youtube

Kiom vi scias

Pri Neltiro de ukleika acido

La komenco kaj fino de purigita nuklea acido

Ĉio estas malfacila komence, purigita nuklea acido estas la plej

Komenco de molekulaj eksperimentoj, por postaj eksperimentoj

Sukceso aŭ malsukceso havas decidan efikon.

Spuro/ultra-spura UV-spektrofotometro estas favorata de multaj sciencaj esploristoj ĉar ĝi povas detekti nuklean acidan koncentriĝon kaj proteinajn kaj salajn restaĵojn simple, rapide kaj ekonomie.

Kiel ni ĉiuj scias, A260 signifas OD-valoron de nuklea acida absorbo, A280 signifas proteinan koncentriĝon-sorbadon OD-valoron, A230 signifas salojonkoncentriĝo-sorbadon OD-valoron, do A260 povas konverti nuklean acidan koncentriĝon, A260/280 signifas proteinrestaĵon, A260/230 signifas sal-jon-restaĵon, sed ĉi tio estas nur regulo bazita sur granda mezuro de esploro.konvencia” kredi, ke ĝi povas klarigi la purecon de DNA kaj RNA alcertagrade.Ĝi ne estas la sola normo por la identigo de nukleacida rendimento kaj pureco, ĝi estas nur uzata kiel referenco, kaj ĝi ne estas "ora normo".

derthfd (1)

La Thermo Fisher ND-2000-manlibro emfazas la fidindecon de la testrezultoj

La kialo estas, ke la rezultoj akiritaj per uzado de mikro/ultramikro UV-spektrofotometro nur reflektas la rendimenton kaj purecon de nuklea acido de la flanko, kaj ekzistas multaj influaj faktoroj (optika vojo, specimena volumo, specimena koncentriĝo, pH-valoro, aliaj jonoj kiuj influas absorban mezuron, ktp.), la mezurita OD-valoro ne estas nepre preciza.Samtempe, pro la manko de specifeco de la absorbadvalora determina materialo, unu-fadena DNA, duoble-fadena DNA, RNA, dNTPoj, kaj iuj proteinoj ĉiuj havas absorbajn pintojn je 260nm ondolongo, kaj la koncentriĝo determinita de A260 sole ne estas nepre la reala DNA aŭ RNA.Koncentriĝo, kaj ĝia integreco kaj degenero ne povas esti juĝitaj.

Kiel do juĝi la kvaliton de nia purigita nuklea acido?Aldone al uzado de mikro/ultramikro UV-spektrofotometro por detekto, metodoj kiel ekzemple agarosa ĝelelektroforezo ankaŭ estas postulataj por vide montri la purecon kaj integrecon de la nuklea acido, kaj indiki la koncentriĝon certagrade.Tiamaniere, la nukleacida rendimento kaj pureco akirita de la detektrezultoj de diversaj metodoj estas kredindaj.

Eksperimenta diagrama komparo

derthfd (2)

Genomic DNA de H1299-ĉeloj estis ĉerpita per la DNA-Eltiro-kompletoj de firmao A, kaj signifa malpura poluado estis vidita, rezultigante altajn OD-valorojn.

(OD-mezurvaloro kaj ekvivalenta elektroferogramo)

Indekso de taksado

Ĉu ekzistas "ora normo" por nukleacida rendimento kaj kvalita testado?

Kiom ni scias, ne ekzistas simpla, rapida kaj malmultekosta metodo.Ĉu ĝi estas spektrofotometro, ĝelelektroforezo aŭ mas-spektrometrio, ili ĉiuj reflektas la koncentriĝon kaj purecon de nuklea acido en la solvo de malsamaj aspektoj, kaj ili devas esti juĝitaj per rilatado al unu la alian.

La plej bona taksa indekso ĉiam estasla sekva eksperimenta aplikaĵo.Ĝi ne influas la efikecon de inversa transskribo kaj PCR-plifortigo.Akiri fidindajn plifortigajn produktojn kaj Ct-valorojn, kaj akiri kompletan sekvencon per sekvencado estas sukcesa nukleacida ekstraktado.

Resume, la vido de nur-rilata teorio devus esti defiita per la vido de "uzi bonajn kontraŭfluajn eksperimentajn rezultojn kiel bonajn eltirajn parametrojn"!

Rekomenditaj Foregene DNA-RNA-ekstraktado-kompletoj por akiri altan DNA/RNA-purecon:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/


Afiŝtempo: Dec-14-2022