• facebook
  • linkedin
  • youtube

Plumbo

Longa ne-koda RNA, lncRNA estas ne-koda RNA kun longo pli granda ol 200 nukleotidoj, ĝenerale inter 200-100000 nt.LncRNA reguligas geneksprimon ĉe epigenetikaj, transskribaj kaj post-transskribaj niveloj, kaj partoprenas en X-kromosoma silentigo, gena impreso kaj kromatina modifo, transskriba aktivigo, transskriba interfero, nuklea transporto, ĉela ciklo-reguligo, ĉela diferenciga reguligo kaj dozo-kompensefikoj (Doza kompensa efiko) kaj multaj aliaj gravaj malsanoj rilatas al homaj evoluaj malsanoj kaj preventado nuntempe estas tre gravaj. la varmaj punktoj en la kampo de biomedicino.

01  Tipoj kaj karakterizaĵoj de LncRNA

novaĵoj 723 (1)

LncRNA estas dividita en multajn tipojn laŭ la malsamaj fontoj de sia formado, kiel montrite en la supra figuro.Havas la sekvajn karakterizaĵojn:

1. lncRNAs estas kutime pli longaj, kun dinamika esprimo kaj malsamaj splisaj metodoj dum diferencigo
2. Kompare kun kodaj genoj, lncRNA kutime havas pli malaltan esprimnivelon
3. La plej multaj lncRNA-oj havas evidentan tempan kaj spacan esprimon specifecon en la procezo de histodiferencigo kaj evoluo
4. Estas karakterizaj esprimoj en tumoroj kaj aliaj malsanoj
5. La subĉelaj lokoj de lncRNA estas diversaj
6. La sinsekvo estas malalta en konservado, sed la funkcio havas certan gradon de konservado, ktp.

02 Oftaj Demandoj pri LncRNA Inversa Transskribo

Pro la malalta enhavo de lncRNA en ĉeloj, longa longo kaj altnivela strukturo, tia RNA ofte havas kompleksajn strukturojn kiel ekzemple tigobukloj aŭ harpingloj, kaj RT-qPCR estas ema al problemoj de malsukcesa inversa transskribo aŭ malalta efikeco.

03 LncRNA inversa transskriba solvo

novaĵoj 723 (2)

En la centra regulo, la procezo de RNA-virusoj uzantaj sian propran inversan transkriptazon por sintezi DNA uzante RNA kiel ŝablonon estas nomita inversa transskribo.La procezo uzi RNA-virusan inversan transkriptazon por sintezi cDNA-ŝablonon en vitro estas nomita inversa transskribo.La ĉefaj elementoj inkluditaj en la inversa transskriba sistemo: RNA-ŝablono, inversa transkriptazo, enkondukoj kaj aliaj komponentoj.

1.RNA ŝablono

La influo de RNA-ŝablono sur inversa transskribo estas reflektita en sia strukturo, pureco kaj integreco.Ju pli alta la pureco kaj integreco de la eltirita RNA, des pli alta la efikeco de inversa transskribo kaj des pli precizaj la postaj kvantaj rezultoj.La RNA purigita per ofte uzitaj RNA-ekstraktaj reakciiloj ofte enhavas restaĵojn de alkoholo kaj guanidinsaloj, kiuj havas fortan inhibician efikon al plej multe de la inversa transkriptazo.

2.Reversa transkriptazo

Inversa transkriptazo havas ŝlosilan influon en la tuta inversa transskriba sistemo.La taŭga temperaturo por la inversa transkriptazo uzita en la plej multaj laboratorioj estas ĝenerale 42 °C.Fakte, la malfermo de la altnivela RNA-strukturo postulas pli altan temperaturon, kaj la postuloj por la inversa transkriptazo estas pli altaj.

3.Primer

Inversa transskribaj enkondukoj inkludas gen-specifajn enkondukojn, hazardajn enkondukojn kaj Oligo dT enkondukojn.La plej multaj lncRNAoj ne enhavas polyA-vostojn, kaj estas grave konvene egali la hazardajn enkondukojn kun Oligo dT.

4.Aliaj komponantoj

Konsiderante la fakton, ke RNA estas aparte facile degradebla, la enkonduko de komponentoj en la inversa transskriba sistemo povas esti minimumigita, kio povas efike malhelpi la eniron de RNase kaj certigi la glatan progreson de inversa transskribo.

Foregenoakiras de RNA-ŝablono, inversan transskribon al qPCR

Amplekse eskortu vian lncRNA-detekto

novaĵoj 723 (3)

Besto Totala RNA IsolecoIlaro (kun gDNA-foriga kolumno)

novaĵoj 723 (4)

Ĉela Totala RNA IsolecoIlaro (kun gDNA-foriga kolumno)

novaĵoj 723 (5)

Lnc-RT HeroTM I (Kun gDNazo) (Super Premix por unua-fadena cDNA sintezo de lncRNA)

novaĵoj 723 (6)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aavantaĝoj ofRNA-ekstraktado:

La ilaro uzas la triageneracian RNA-ekstraktan teknologion, ne necesas uzi DNase.

11 minutojn de 96, 24, 12, kaj 6-bone plato kulturitaj ĉeloj, alt-efikeca eltiro de gDNA-libera, altpura, altkvalita totalĉela RNA.

Avantaĝoj de lncRNA inversa transskribo:

Inversa transskriba sistemo speciale evoluigita por LncRNA por rapide forigi genoman DNA-poluadon.

La inversa transskriba sistemo havas altan termikan stabilecon kaj ankoraŭ havas bonan inversan transskriban rendimenton je 50 °C.

Ŝablonoj kun alta GC-enhavo kaj kompleksa sekundara strukturo povas esti inversigitaj kun alta efikeco.

Avantaĝojof qPCR:

Varma ekfunkciigo Foregene Taq Polymerase havas pli altan plifortigan efikecon, pli altan plifortigan sentemon kaj pli altan plifortigan specifecon.

La optimumigita Real PCR Easy Mix faras ke SYBR Green I havas pli altan detektan sentivecon, kaj ĝia fluoreskeca intenseco estas 3-5-oble tiu de similaj produktoj, kiuj povas renkonti la bezonojn de malsamaj specoj de fluoreskecaj kvantaj eksperimentoj.


Afiŝtempo: Jul-23-2021