La sekva analizo de eblaj problemoj enBukaloswab/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.
La puriga kolono estas ŝtopita
En ĉi tiu ilaro, en la operacio de eltiro de genoma DNA, la puriga kolumno estas rekte adsorbita sur la specimena enzima liza miksaĵo sen centrifuga paŝo, kaj la puriga kolumno povas esti blokita pro nekompleta enzimigo kaj alta viskozeco de la specimeno.
La sekvaj eblaj kaŭzoj estas kiel sekvas:
1. Nekompleta enzima digesto de histoprovaĵoj.
Rekomendo: La specimena pretigtempo de Foregene Protease povas esti taŭge plilongigita aŭ la supernatante povas esti prenita post centrifugado je 12,000 rpm (~13,400× g) dum 5 min.
2. Troa uzo de histoprovaĵoj aŭ grandaj histoj.
Rekomendo: Plej bone ne superu 1Bukalo swab en la specimeno;se la specimeno estas tro granda, pliigu la dozon de Buffer ST1, Foregene Protease, bufro ST2 laŭe.
3. La specimena viskozeco estas tro alta.
Rekomendo: Provaĵoj povas esti taŭge diluitaj kun 10 mM de Tris-HCl antaŭ genoma DNA-ekstraktado.
4. Fragmentoj de la sangokarto estis suĉitaj.
Rekomendo: La pasema centrifuga tempo de paŝo 6 de sangomakulo (FTA Card) genoma eltiro povas esti taŭge plilongigita.
Malalta rendimento aŭ neniu DNA
Ofte ekzistas diversaj faktoroj, kiuj influas genoman DNA-rendimenton, inkluzive de specimeno origino, specimenaj konservadkondiĉoj, provaĵpreparo, manipulado ktp.
Genoma DNA ne povas esti akirita dum eltiro
La eblaj kaŭzoj estas kiel sekvas:
1. Nedeca konservado de specimenoj aŭ konservado tro longa kondukas al genoma DNA-degenero.
Rekomendo: Buŝaj swaboj prefere estu freŝe provitaj, kaj ne estas konsilinde uzi konservitajn swabojn por genomaj DNA-eltiraj operacioj;specimenoj de sangomakulo devas certigi, ke la kvalito estas kvalifikita kaj la stokadotempo ne estu tro longa.
2. Tro malmulte da histouzado povas rezultigi neniun eltiron de la responda genoma DNA.
Rekomendo: Sekvu labuccal Swab specimeni instrukciojn en la operacio gvidilo, kaj viŝi kiel eble plej multajn fojojn por ke sufiĉaj ĉeloj povas esti alfiksitaj al la buŝa swab por genoma DNA-eltiro;por sangomakula specimena eltiro, la sangomakula tranĉa areo povas esti taŭge pliigita.
3. Foregene Protease estas nedece konservita, rezultigante malpliigon de ĝia aktiveco aŭ malaktivigo.
Rekomendo: Konfirmu la konservajn kondiĉojn dela Foregena Proteazo aŭ anstataŭigi ĝin per nova Foregene Protease por enzimeca reago.
4. Nedeca konservado de la ilaro aŭ stokado tempo estas tro longa, rezultigante malsukceson de iuj komponantoj en la ilaro.
Rekomendo: Aĉetu novanBukalo swab DNAizolo ilaro por rilataj proceduroj.
5. Buffer WB ne aldonas absolutan etanolon.
Rekomendo: Konfirmu, ke bufro WB aldonas la ĝustan volumenon de absoluta etanolo.
6. La eluento ne estas ĝuste aldonita al la silikona filmo.
Rekomendo: Aldonu 65°Cantaŭvarmigita eluvaĵo falas al la mezo de la silikona membrano kaj lasu ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por pliigi la eluian efikecon.
Lduk-rendimenta genoma DNA izolita
La sekvaj eblaj kaŭzoj estas kiel sekvas:
1. Nedeca konservado de specimenoj aŭ konservado tro longa kondukas al genoma DNA-degenero.
Rekomendo: Buŝaj lamvoj estas prefere ĵus provitaj, kaj konservitaj lamvoj ne estu uzataj por eltiro de genoma DNA.
2. Se la kvanto de histoprovaĵo estas tro malgranda, la ĉerpita genoma DNA enhavo estos malpli.
Rekomendo: Sekvu la instrukciojn pri buŝa swab-specimenado en la operacia gvidilo, viŝante kiel eble plej multajn fojojn por ke sufiĉaj ĉeloj estu alkroĉitaj al la buŝa swab por eltiro de genoma DNA.
3. Foregene Protease estas nedece konservita, rezultigante malpliigon de ĝia aktiveco aŭ malaktivigo.
Rekomendo: Konfirmu la konservajn kondiĉojn dethe Foregene Proteazo aŭ anstataŭigi ĝin per nova Antaŭgena Proteazo por enzimeca reago.
4. Eluentproblemoj.
Rekomendo: Uzu Buffer EB por eluo;se vi uzas ddH2O aŭ aliaj eluantoj, konfirmu ke la pH de la eluato estas inter 7.0-8.5.
5. La eluato ne estas ĝuste aldonita gute.
Rekomendo: Aldonu eluiĝajn gutojn al la mezo de la silikona membrano kaj lasu ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por pliigi eluian efikecon.
6. La elua likvaĵo akumuliĝas tro malmulte.
Rekomendo: Uzu eluivon por genoma DNA-eluo kiel postulas la instrukciojn, almenaŭne malpli ol 15μl.
Low pureco of genoma DNAizolita
Malalta genoma DNA-pureco povas konduki al malsukceso aŭ nekontentigaj rezultoj de kontraŭfluaj eksperimentoj, kiel ekzemple: enzimoj ne povas esti tranĉitaj, PCR ne povas ricevi la genan fragmenton de intereso, ktp.
La eblaj kaŭzoj estas kiel sekvas:
1. Heteroprotein-poluado, RNA-poluado.
Analizo: La puriga kolumno ne estis lavita uzante Buffer PW;la Buffer PW-lava puriga kolumno ne estis lavita uzante la ĝustan centrifugan rapidon.
Rekomendo: Certigu, ke ne estas precipitaĵo en la supernatante antaŭ ol aldoni etanolon;nepre lavi la purigan kolonon laŭ la instrukcioj, kaj ĉi tiu paŝo ne povas esti preterlasita.
2. Malpura jona poluado.
Analizo: Buffer WB-lava purigkolono estis preterlasita aŭ lavita nur unufoje, rezultigante restan jonan poluadon.
Rekomendo: Nepre lavi Buffer WB 2 fojojn kiel direktite por forigi restajn jonojn kiel eble plej multe.
3. RNA-enzima poluado.
Analizo: Fremdaj RNasoj estis aldonitaj al bufro;Buffer PW-lavoperacio estis malĝusta, rezultigante RNase-restaĵojn, influante kontraŭfluajn RNA-eksperimentajn operaciojn, kiel ekzemple en vitra transskribo.
Rekomendo: Foregene serio nuklea acidoisolailaroj povas forigi RNA sen kroma aldono de RNazo,tiel buŝa Swab/FTA Card DNA-Izola Ilaroneedn't aldoni RNazon;nepre sekvu la instrukciojn por Buffer PW-lavado-puriga kolumno, kaj ĉi tiu paŝo ne povas esti preterlasita.
4. Etanola restaĵo.
Analizo: Buffer WB ne faris malplenan tubon centrifugadon post lavi la purigan kolonon.
Rekomendo: Faru la ĝustan centrifugan operacion de malplena tubo laŭ la instrukcioj.
5. Alia malpura poluado.
Analizo: Konservitaj specimenoj aŭ specialaj specimenoj ne estas antaŭtraktataj.
Rekomendo: Plene antaŭtraktu la specimenon kiel instrukciite.
Afiŝtempo: Mar-18-2022
