• facebook
  • linkedin
  • youtube

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

Oftaj Demandoj porAnimal Total RNA-Izola ilaro

La sekva analizo de la problemoj en kiuj vi eble renkontosbesta histo/ĉela RNA-ekstraktado will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA ne estas ĉerpita aŭ RNA-rendimentoj estas malaltaj

Ofte ekzistas diversaj faktoroj, kiuj influas reakivan efikecon, kiel ekzemple: histoprovaĵenhavo de RNA, metodo de operacio, eluovolumeno, ktp.

1. Glacia bano aŭ kriogena (4 °C) centrifugado estis farita dum operacio.

Rekomendo: Funkcii ĉe ĉambra temperaturo (15-25 °C) dum la tuta procezo, ne glacibanu kaj centrifugu ĉe malaltaj temperaturoj.

2. Nedeca specimena konservado aŭ troa specimena konservado.

Rekomendo: Konservu specimenojn ĉe -80 °C aŭ frostiĝu en likva nitrogeno kaj evitu ripetan frostig-degelon;provu uzi freŝan histon aŭ kulturitajn ĉelojn por RNA-eltiro.

3. Nesufiĉa specimena lizo.

Rekomendo: Kiam homogenigas histon, certigu, ke la histo estas sufiĉe homogenigita kaj ke la histoĉeloj estas sufiĉe dividitaj por klarigi la liberigon de RNA.

4. La eluvaĵo ne estas ĝuste aldonita.

Rekomendo: Konfirmu, ke RNase-Free ddH2O estas aldonita gute al la mezo de la puriga kolonmembrano.

5. La ĝusta volumo de absoluta etanolo ne estis aldonita al Buffer RL2 aŭ Buffer RW2.

Rekomendo: Sekvu la instrukciojn, aldonu la ĝustan volumon de absoluta etanolo al Buffer RL2 kaj Buffer RW2 kaj miksu bone antaŭ ol uzi la ilaron.

6. Dozo de specimeno de histo ne taŭgas.

Rekomendo: Uzu 10-20 mg da histo aŭ (1-5) × 106ĉeloj per 500 μl bufro RL1, ĉar troa histouzo povas rezultigi reduktitan RNA-ekstraktadon.

7. Nedeca eluciovolumo aŭ nekompleta elucio.

Rekomendo: La elucia volumo de la puriga kolumno estas 50-200 μl;se la elucia efiko ne estas kontentiga, oni rekomendas plilongigi la ĉambran temperaturon-lokigan tempon post aldoni antaŭvarmigitan RNase-Free ddH.2O, ekz. dum 5-10 min.

8.La puriga kolumno havas etanolan restaĵon post Buffer RW2-lavo.

Rekomendo: Se estas etanola restaĵo post Buffer RW2-lavado, malplena tubo centrifugado dum 1min, la tempo por la malplena tubo centrifuga operacio povas esti pliigita al 2min, aŭ la puriga kolumno povas esti metita ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por adekvate forigi la restan etanolon.

Purigita RNA estas degradita

La kvalito de la purigita RNA estas rilatita al faktoroj kiel ekzemple la konservado de la provaĵo, RNase-poluado, kaj manipulado, ktp.

1. Specimenoj de histo ne estas konservitaj ĝustatempe.

Rekomendo: Se histoprovaĵoj aŭ ĉeloj ne estas uzataj ĝustatempe post kolekto, tuj kriokonservu je -80 °C aŭ likva nitrogeno.Por ĉerpi RNA, uzu ĵus prenitan histon aŭ ĉelan specimenon kiam ajn eblas.

2. Ripeta frosto-degelo de histoprovaĵoj.

Rekomendo: Dum stokado de histoprovaĵoj, estas plej bone tranĉi ilin en malgrandajn pecojn por konservado, kaj forigi unu el la pecoj kiam ili uzas ilin por eviti ripetan frostig-degelon de la specimeno kaj la degeneron de RNA.

3. RNase estas enkondukita aŭ ne portanta forĵeteblajn gantojn, maskojn, ktp dum la operacio.

Rekomendo: RNA-ekstraktado-eksperimentoj estas plej bone faritaj en apartaj RNA-manipuladĉambroj kaj la tablo estas malbarita antaŭ la eksperimento.

Portu foruzeblajn gantojn kaj maskojn dum la eksperimento por minimumigi RNA-degeneron kaŭzitan de la enkonduko de RNase.

4. Reactivoj estas poluitaj per RNase dum uzo.

Rekomendo: Anstataŭigi per nova Besta Totala RNA-Izola Ilaro por rilataj eksperimentoj.

5. La centrifugilaj tuboj, pintoj ktp uzataj en RNA-manipulado estas poluitaj per RNase.

Rekomendo: Konfirmu, ke la centrifugilaj tuboj, pintoj, pipetoj ktp uzataj en RNA-eltiro estas ĉiuj RNase-Liberaj.

Purigita akirita RNA influas kontraŭfluajn eksperimentojn

RNA purigita de la purigo kolumno, se la salo jonoj, proteino enhavo estas tro granda influos la kontraŭflua eksperimento, kiel: inversa transskribo,Northern Blot et al.

1. La eluita RNA havas saljonajn restaĵojn.

Rekomendo: Konfirmu, ke la ĝusta volumo de etanolo estis aldonita al Buffer RW2 kaj faru 2 purigajn kolumnlavojn ĉe la centrifuga rapido indikita por operacio;se ekzistas iu sala jona restaĵo, lasu la purigan kolumnon al Buffer RW2 dum 5 minutoj ĉe ĉambra temperaturo kaj faru centrifugadon por maksimumigi la forigon de salo-poluado.

2. Etanola restaĵo en eluita RNA.

Rekomendo: Konfirmu, ke post la lavado de bufro RW2, faru la malplenan tubon centrifugan operacion kun la centrifuga rapido indikita por operacio, pliigu la tempon de la malplenan tubon centrifugan operacion al 2 minutoj se ankoraŭ estas etanola restaĵo, aŭ lasu ĝin ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj post la malplena tubo centrifuga por maksimumigi la forigon de etanola restado.

Izoliĝo de specimenaj specoj de nulceacido

La RNA-Izolaj ilaroj de Foregene povas akiri totalan RNA-izoladon/eltiradon de la sekvaj specimenaj fontoj: Besta histo, planto, ĉeloj, viruso, sango, ktp.

Kiel mi konservas la ilaron

Stokado de ĉambra temperaturo dum 24 monatoj.


Afiŝtempo: Mar-01-2022