Bukkala Swab/FTA-Karto DNA-Izola Ilaro Genomic DNA-Eltiro aŭ Puriga Ilaro de Buccal Swabs
Ilaro Priskribo:
Rapide purigu altkvalitan genoman DNA el buŝaj ŝabloj/FTA-Kartaj specimenoj.
◮Neniu RNase-poluado:La DNA-Nur-Kolumno provizita de la ilaro ebligas forigi la RNA de la genoma DNA sen aldoni RNase dum la eksperimento, malhelpante la laboratorion esti poluita de eksogena RNase.
◮Rapida rapido:Foregene Protease havas pli altan agadon ol similaj proteazoj, kaj digestas histoprovaĵojn rapide;la operacio estas simpla, kaj la operacio de eltiro de genoma DNA povas esti kompletigita ene de 20-80 minutoj.
◮Konvena:La centrifugado estas farita ĉe ĉambra temperaturo, kaj ne necesas 4 °C malalt-temperatura centrifugado aŭ etanola precipitaĵo de DNA.
◮Sekureco:Ne necesas eltiro de organika reakciaĵo.
◮Alta kvalito:La ĉerpita genoma DNA havas grandajn fragmentojn, neniun RNA, neniun RNazon, kaj ekstreme malaltan jonenhavon, kiuj povas renkonti la postulojn de diversaj eksperimentoj.
◮Mikro-elucia sistemo:Ĝi povas pliigi la koncentriĝon de genoma DNA, kio estas oportuna por kontraŭflua detekto aŭ eksperimento.
Priskribo
Ĉi tiu ilaro disponigas efikan kaj rapidan metodon por akiri altkoncentretan genoman DNA el buŝaj swaboj kaj FTA-Karto (sangomakuloj).Uzante nian kompanion's unika DNA-nur silika membrano spinkolono kaj formulo, kombinita kun Foregene Protease, alt-koncentriĝo, altkvalita genoma DNA povas esti ĉerpita en 80 minutoj.La speciale dizajnita malgranda puriga kolono ligas genoman DNA, kaj la DNA povas esti eluzita per malgranda kvanto (15μl) eluosistemo por pliigi la koncentriĝon de la akirita genoma DNA, kiu estas oportuna por kontraŭflua detekto aŭ eksperimento.La ilaro povas prilabori unu aŭ plurajn specimenojn samtempe, kaj la puriga procezo ne postulas eltiron de organikaj substancoj kiel fenolo, kloroformo, kaj temporaba izopropanolo aŭ etanola precipitaĵo, kaj la operacio estas simpla kaj tempoŝpara.
Specifoj
50 Preparoj
Kit-komponantoj
| Bufro ST1 |
| Bufro ST2 |
| Lineara Akrilamido |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Antaŭgena Proteazo |
| DNA-Nur-Kolumno |
| Instrukcioj |
Trajtoj & avantaĝoj
-Neniu RNase-poluado: La DNA-Nur-Kolumno provizita de la ilaro ebligas forigi RNA el genoma DNA sen aldoni RNase dum la eksperimento, evitante ke la laboratorio estu poluita de eksogena RNase.
-Rapida rapideco: Foregene Protease havas pli altan aktivecon ol similaj proteazoj, digestas specimenojn rapide;simpla operacio.
-Konvena: La centrifugado estas farata ĉe ĉambra temperaturo, kaj ne necesas 4°C malalt-temperatura centrifugado aŭ etanola precipitaĵo de DNA.
-Sekureco: Ne necesas eltiro de organika reakciaĵo.
-Altkvalita: La ĉerpita genoma DNA havas grandajn fragmentojn, neniun RNA, neniun RNase, kaj ekstreme malaltan ion enhavon, kiuj povas plenumi la postulojn de diversaj eksperimentoj.
-Mikro-elucia sistemo: Ĝi povas pliigi la koncentriĝon de genoma DNA, kio estas oportuna por kontraŭflua detekto aŭ eksperimento.
Kit-aplikaĵo
Ĝi taŭgas por purigado de genoma DNA el la sekvaj specimenoj: buŝaj ŝumoj, FTA-Karto (sangomakuloj).
Stokado kaj Konsumodaŭro
-Ĉi tiu ilaro povas esti konservita dum 12 monatoj sub sekaj kondiĉoj ĉe ĉambra temperaturo (15-25 °C);se ĝi devas esti konservita por pli longa tempo, ĝi povas esti stokita je 2-8 °C.
Noto: Se stokita ĉe malalta temperaturo, la solvo estas ema al precipitaĵo.Antaŭ uzo, nepre metu la solvon en la ilaron ĉe ĉambra temperaturo dum tempodaŭro.Se necese, antaŭvarmigu ĝin en akvobanon je 37 °C dum 10 minutoj por solvi la precipitaĵon, kaj miksu ĝin antaŭ uzo.
-Foregene Protease-solvo havas unikan formulon, kiu estas aktiva kiam konservata ĉe ĉambra temperaturo dum longa tempo (3 monatoj);ĝia agado kaj stabileco estos pli bonaj se stokitaj je 4 °C, do rekomendas konservi ĝin je 4 °C, memoru ne konservi ĝin je -20 °C.
La puriga kolono estas ŝtopita
En ĉi tiu ilaro, en la operacio de eltiro de genoma DNA, la puriga kolumno estas rekte adsorbita sur la specimena enzima liza miksaĵo sen centrifuga paŝo, kaj la puriga kolumno povas esti blokita pro nekompleta enzimigo kaj alta viskozeco de la specimeno.
La sekvaj eblaj kaŭzoj estas kiel sekvas:
1. Nekompleta enzima digesto de histoprovaĵoj.
Rekomendo: La specimena pretigtempo de Foregene Protease povas esti taŭge plilongigita aŭ la supernatante povas esti prenita post centrifugado je 12,000 rpm (~13,400 × g) dum 5 min.
2. Troa uzo de histoprovaĵoj aŭ grandaj histoj.
Rekomendo: Estas plej bone ne superi 1 Buccal swab en la specimeno;se la specimeno estas tro granda, pliigu la dozon de Buffer ST1, Foregene Protease, bufro ST2 laŭe.
3. La specimena viskozeco estas tro alta.
Rekomendo: Provaĵoj povas esti taŭge diluitaj kun 10 mM de Tris-HCl antaŭ genoma DNA-ekstraktado.
4. Fragmentoj de la sangokarto estis suĉitaj.
Rekomendo: La pasema centrifuga tempo de paŝo 6 de sangomakulo (FTA Card) genoma eltiro povas esti taŭge plilongigita.
Malalta rendimento aŭ neniu DNA
Ofte ekzistas diversaj faktoroj, kiuj influas genoman DNA-rendimenton, inkluzive de specimeno origino, specimenaj konservadkondiĉoj, provaĵpreparo, manipulado ktp.
Genoma DNA ne povas esti akirita dum eltiro
La eblaj kaŭzoj estas kiel sekvas:
1. Nedeca konservado de specimenoj aŭ konservado tro longa kondukas al genoma DNA-degenero.
Rekomendo: Buŝaj swaboj prefere estu freŝe provitaj, kaj ne estas konsilinde uzi konservitajn swabojn por genomaj DNA-eltiraj operacioj;specimenoj de sangomakulo devas certigi, ke la kvalito estas kvalifikita kaj la stokadotempo ne estu tro longa.
2. Tro malmulte da histouzado povas rezultigi neniun eltiron de la responda genoma DNA.
Rekomendo: Sekvu la instrukciojn pri buŝa swab-specimenado en la operacia gvidilo, kaj viŝu kiel eble plej multajn fojojn por ke sufiĉe da ĉeloj estu alkroĉitaj al la buŝa swab por eltiro de genoma DNA;por sangomakula specimena eltiro, la sangomakula tranĉa areo povas esti taŭge pliigita.
3. Foregene Protease estas nedece konservita, rezultigante malpliigon de ĝia aktiveco aŭ malaktivigo.
Rekomendo: Konfirmu la konservajn kondiĉojn de la Foregene Proteazo aŭ anstataŭigu ĝin per nova Foregene Protease por enzimeca reago.
4. Nedeca konservado de la ilaro aŭ stokado tempo estas tro longa, rezultigante malsukceson de iuj komponantoj en la ilaro.
Rekomendo: Aĉetu novan Buccal Swab DNA-izolan ilaron por rilataj proceduroj.
5. Buffer WB ne aldonas absolutan etanolon.
Rekomendo: Konfirmu, ke bufro WB aldonas la ĝustan volumenon de absoluta etanolo.
6. La eluento ne estas ĝuste aldonita al la silikona filmo.
Rekomendo: Aldonu 65 °C antaŭvarmigitajn eluigajn gutojn al la mezo de la silikona membrano kaj lasu ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por pliigi la eluian efikecon.
Malalt-rendimenta genoma DNA izolita
La sekvaj eblaj kaŭzoj estas kiel sekvas:
1. Nedeca konservado de specimenoj aŭ konservado tro longa kondukas al genoma DNA-degenero.
Rekomendo: Buŝaj lamvoj estas prefere ĵus provitaj, kaj konservitaj lamvoj ne estu uzataj por eltiro de genoma DNA.
2. Se la kvanto de histoprovaĵo estas tro malgranda, la ĉerpita genoma DNA enhavo estos malpli.
Rekomendo: Sekvu la instrukciojn pri buŝa swab-specimenado en la operacia gvidilo, viŝante kiel eble plej multajn fojojn por ke sufiĉaj ĉeloj estu alkroĉitaj al la buŝa swab por eltiro de genoma DNA.
3. Foregene Protease estas nedece konservita, rezultigante malpliigon de ĝia aktiveco aŭ malaktivigo.
Rekomendo: Konfirmu la konservajn kondiĉojn de la Foregene Proteazo aŭ anstataŭigu ĝin per nova Foregene Protease por enzimeca reago.
4. Eluentproblemoj.
Rekomendo: Uzu Buffer EB por eluo;se vi uzas ddH2O aŭ aliaj eluantoj, konfirmu ke la pH de la eluato estas inter 7.0-8.5.
5. La eluato ne estas ĝuste aldonita gute.
Rekomendo: Aldonu eluiĝajn gutojn al la mezo de la silikona membrano kaj lasu ĉe ĉambra temperaturo dum 5 minutoj por pliigi eluian efikecon.
6. La elua likvaĵo akumuliĝas tro malmulte.
Rekomendo: Uzu eluivon por genoma DNA-eluo kiel postulas la instrukciojn, almenaŭ ne malpli ol 15 μl.
Malalta pureco de genoma DNA izolita
Malalta genoma DNA-pureco povas konduki al malsukceso aŭ nekontentigaj rezultoj de kontraŭfluaj eksperimentoj, kiel ekzemple: enzimoj ne povas esti tranĉitaj, PCR ne povas ricevi la genan fragmenton de intereso, ktp.
La eblaj kaŭzoj estas kiel sekvas:
1. Heteroprotein-poluado, RNA-poluado.
Analizo: La puriga kolumno ne estis lavita uzante Buffer PW;la Buffer PW-lava puriga kolumno ne estis lavita uzante la ĝustan centrifugan rapidon.
Rekomendo: Certigu, ke ne estas precipitaĵo en la supernatante antaŭ ol aldoni etanolon;nepre lavi la purigan kolonon laŭ la instrukcioj, kaj ĉi tiu paŝo ne povas esti preterlasita.
2. Malpura jona poluado.
Analizo: Buffer WB-lava purigkolono estis preterlasita aŭ lavita nur unufoje, rezultigante restan jonan poluadon.
Rekomendo: Nepre lavi Buffer WB 2 fojojn kiel direktite por forigi restajn jonojn kiel eble plej multe.
3. RNA-enzima poluado.
Analizo: Fremdaj RNasoj estis aldonitaj al bufro;Buffer PW-lavoperacio estis malĝusta, rezultigante RNase-restaĵojn, influante kontraŭfluajn RNA-eksperimentajn operaciojn, kiel ekzemple en vitra transskribo.
Rekomendo: Foregene-seriaj nukleaacido-izolaj ilaroj povas forigi RNA sen plia aldono de RNazo, do buŝa Swab/FTA-Karto DNA-Izola ilaro ne bezonas aldoni RNazon;nepre sekvu la instrukciojn por Buffer PW-lavado-puriga kolumno, kaj ĉi tiu paŝo ne povas esti preterlasita.
4. Etanola restaĵo.
Analizo: Buffer WB ne faris malplenan tubon centrifugadon post lavi la purigan kolonon.
Rekomendo: Faru la ĝustan centrifugan operacion de malplena tubo laŭ la instrukcioj.
5. Alia malpura poluado.
Analizo: Konservitaj specimenoj aŭ specialaj specimenoj ne estas antaŭtraktataj.
Rekomendo: Plene antaŭtraktu la specimenon kiel instrukciite.
